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传染性法氏囊病病毒HB-bp株A节段基因序列的克隆和分析

倪凤娥  
【摘要】: 给4周龄SPF雏鸡人工接种鸡传染性法氏囊病病毒HB-bp毒株,48小时后采取法氏囊,用双Licl分级沉淀法提纯全长基因组dsRNA,设计一对引物,通过RT-PCR方法进行了体外扩增,获得HB株A节段基因全长cDNA。经琼脂糖电泳检测,将大小与预计分子量一致的片段纯化后连接到pMD18-T载体中,再转化到JM109感受态细胞,得到的转化子经分子量比较、PCR鉴定和酶切分析筛选阳性克隆,结果表明,得到的阳性重组子中含有A节段全长基因,插入到载体中的方向正确。经核苷酸测定,该基因全长3142bp,含长为3036bp和435bp的两个开放阅读框,大阅读框ORF-1编码的氨基酸数为1012个,小阅读框ORF-2编码145个,分别与已报道的VP2-4-3和VP5氨基酸相符。另外,VP5大部分与VP2-4-3重叠。构建了系统发育树,从核酸和蛋白质水平上与其它已公开发表的IBDV血清Ⅰ型、变异株、超强毒株、血清Ⅱ型毒株进行同源性比较。结果表明:与其它血清Ⅰ型毒株相比,HB-bp株在核苷酸水平上有32-146个核苷酸的差异,同源性为95.4%~98.8%;在氨基酸水平上有5-35个氨基酸的替代,同源性为96.9%~99.5%。与血清Ⅱ型OH毒株同源性为89.8%,与23-82毒株同源性为90.8%。比较结果与超强毒株同源性最高,推测本实验得到的HB-bp株为中国的一个超强毒株。本实验可以帮助我们进一步探讨IBDV抗原性漂移和毒力变化的分子生物学机制,追溯IBDV的起源,理解病毒的传播方式。同时也为研制开发基因重组疫苗和缺失疫苗打下一定的基础。


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