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梨(Pyrus L.)AFLP反应体系的建立及在品种鉴定中的应用

鲁凤娟  
【摘要】:AFLP(扩增片段长度多态性)是一种新型的分子标记技术,目前已广泛应用于分子生物学及动植物育种等领域的研究。尽管前人利用分子标记技术对梨也进行了一些研究,但利用AFLP技术进行研究的报道很少。故本研究对影响AFLP技术体系的多方面因素进行了探讨,同时对梨属44个品种(包括6组芽变)进行了DNA水平上的研究,探讨AFLP技术在梨品种鉴定中的应用;通过对梨属部分种质进行鉴定和亲缘关系分析,解决如苹果梨等分类存在争议的品种的归属问题,以期为梨的高密度分子遗传图谱的构建、目标基因的定位和核心种质的确立提供参考。主要研究结果如下: 1.对影响梨AFLP指纹分析的多个因素进行了实验与摸索,最后建立了一套梨AFLP指纹分析的最适体系。该体系中各优化因素为:①模板DNA的浓度为150ng/μL,模板DNA用量为450ng;②酶切体系中,MseⅠ和EcoRⅠ各加入3Units,使用MseⅠ Buffer,反应时间为5h;③连接酶最适用量为1.5Units,反应时间为10h;④连接产物最适稀释倍数为5倍;⑤预扩增产物最适稀释倍数为5倍。 2.对64个引物组合进行筛选,选出10个引物组合对44个梨品种进行扩增,共扩增出371个位点,平均每对引物扩增37.1个位点,其中多态性位点306个,占总扩增位点数的82.5%。 3.初步建立了梨属44个品种的AFLP指纹。利用10个引物组合对44个供试品种进行扩增,其中M-CTT/E-ACG能将44个供试品种(包括6组芽变)全部区分开,充分显示了AFLP鉴别率高的优越性。 4.共有19个品种扩增出特有标记,占供试类型的48.2%。其中属于西洋梨系统的4个品种,分别为红巴梨、保利阿斯卡、朱丽比恩和茄梨;3个来源于新疆梨的品种,分别为库尔勒香梨、早熟句句和黄酸梨;另外还有黄金梨、贵妃、中梨1号等12个品种。 5.对供试44个梨品种AFLP数据结果进行了聚类分析。结果表明,白梨系统与砂梨系统品种首先聚在一起,然后是秋子梨系统,最后与西洋梨系统聚在一起。 6.探讨了苹果梨的分类地位。苹果梨与白梨系统的鸭梨欧氏距离最近为7.416,而与砂梨系统的新星为7.746,与秋子梨系统的小香水为8.062,与西洋梨系统的红茄欧氏距离为9.849。从聚类树状图中可以看出,苹果梨首先与金花4号聚在一起,再与其杂种后代苹香聚在一起,认为将苹果梨归为白梨系统比较适宜。


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