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猪伪狂犬病毒的分离鉴定及检测方法的建立

郁宏伟  
【摘要】:本研究从河北省某猪场疑似伪狂犬病的猪体内分离到的一株伪狂犬病毒(PRV),并进行了生物学特性鉴定。病毒分离自一头流产猪胎儿的脑组织。用分离毒感染鸡胚可见到典型的病变及尿囊膜的痘斑,感染PK-15细胞后产生了典型的圆缩、集聚,脱落等细胞病变,连续传代后,病变时间稳定在20小时左右。病毒在PK-15细胞上的TCID_(50)为10~(-6.11)/20μl,对热、氯仿和PH3酸敏感,这些理化性质均符合疱疹病毒的特性。采用固定血清、稀释病毒的方法进行中和实验,表明该分离株能被猪伪狂犬病毒(PRV)的阳性血清所中和,计算其中和指数为479。在电镜下观察到110-140nm圆形有囊膜的病毒粒子。用病毒感染细胞的上清液接种家兔,出现典型的伪狂犬病奇痒症状。以分离病毒的DNA为模板,通过PCR技术扩增出gp50基因217bp长的片段,从核酸水平证实了所分离的病毒为PRV。以上鉴定结果表明从该猪场分离到的病毒是猪伪狂犬病病毒,并命名为冀A株。 由于猪伪狂犬病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)均是引起母猪流产的病原且都是DNA病毒,加之二者临床症状相似,所以很难鉴别。为解决这一技术难题,作者根据PRV和PPV 2种病原体的基因保守序列,分别设计并合成了与PRV的gp50基因序列和PPV的VP2基因互补的2对引物,进行单相PCR,分别扩增出预期的217bp片段及158bp片段,且对不同核酸提取方法进行了比较;同时,用这2对引物对混合样品中的PRV和PPVDNA模板进行二联PCR扩增及二联PCR反应条件的优化,结果均得到2条与试验设计相符的217bp(PRV)和158bp(PPV)特异性条带。敏感性检测结果表明,对PRV的检测可以达到10~(-6.11)/20μl TCID_(50)、对PPV的检测可以达到0.008HA单位的核酸模板。本研究建立的二联PCR方法,可以在24h内对样品进行快速鉴别检测,可作为PRV、PPV感染和临床样品检测的可靠手段。 为使该鉴别诊断方法易于在临床上推广,大众化、易操作、直观,本研究还建立了SPA协同凝集诊断PR。用富含A蛋白的金黄色葡萄球菌国际标准株(Cowan Ⅰ)标记了抗伪狂犬病毒的高免血清,建立了诊断猪伪狂犬病的SPA平板协同凝集试验。经特异性检验、敏感性试验,对比试验及临床诊断试验表明,该方法具有敏感性高、特异性强、重复性好等优点,且操作方法简便、快速,节省材料,无需特殊仪器,是一种适用于基层猪场对伪狂犬病的快速诊断和流行病学调查的新技术。


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13 吴丹,童光志,仇华吉,薛强,周艳君,李景鹏;猪细小病毒SY-99株非结构蛋白NS1基因的克隆与原核表达[J];中国农业科学;2003年11期
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