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河北省犊牛轮状病毒的分离鉴定及特性研究

苏小庚  
【摘要】:本研究对河北省部分地区规模化奶牛场及散养户进行了轮状病毒感染的调查,将采自奶牛场及散养户的腹泻犊牛粪便,用轮状病毒酶标诊断试剂盒进行检测,轮状病毒感染的阳性率为7%,发病犊牛均未见死亡。对检测结果为阳性的粪便进行离心、过滤除菌等处理后,用胰蛋白酶消化,接种Marc-145细胞,盲传数代后分离得到一株牛轮状病毒。该分离毒于第三代出现可见的细胞病变,其病变形态与标准毒NCDV相似。随着传代次数的增加,该分离毒出现细胞病变的时间提前,细胞病变程度亦随之加剧。病毒在Marc-145细胞上传至第八代时测得TCID_(50)为10~(-4.70)/20μL,第九代TCID_(50)为10~(-5.33)/20μL。电镜负染观察,病毒粒子约70nm,呈典型的车轮状。理化特性研究表明,该分离毒株对氯仿、乙醚有抵抗力;耐pH3.0处理60min;耐热性试验中,50℃30min能使该病毒感染力下降10~(1.95)TCID_(50)。病毒双层蚀斑试验表明,该分离毒能形成多数直径1mm左右的不规则形状的蚀斑,镜下观察为死亡的细胞团块。 提取分离毒基因组,对其进行基因组的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),其电泳型为4:2:3:2型,与标准毒NCDV一致,属于A群轮状病毒。选取A群轮状病毒VP7基因上的2段高度保守的核苷酸序列设计引物,对该分离毒进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术鉴定,成功的扩增出唯一的342bp的目的条带,与标准毒NCDV一致,而正常Marc-145细胞、牛病毒性腹泻/粘膜病病毒的RT-PCR结果均为阴性。


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