核桃遗传多样性分析及核心种质的构建

【摘要】：核桃是原产于我国的重要干果树种,其种质资源十分丰富,存在许多特异种质资源,但是对我国核桃属植物遗传多样性的研究尚少。本试验利用AFLP分子标记技术对普通核桃131份材料的遗传多样性进行了分析,构建了核桃的核心种质,并对核桃种间的亲缘关系进行了研究。主要结果如下: 1.确定了适于AFLP分析的核桃基因组DNA提取方法为改良CTAB法,其提取液成份为:100mmol/L Tris-HCl,pH 8.0;20mmol/L EDTA:1.4mol/LNaCl;2%CTAB:2%PVP_(40):100mmol/L B-巯基乙醇和10mmol/L Na_2S_2O_5。粗提后的DNA经RNase液、苯酚-氯仿各抽提一次,氯仿-异戊醇抽提两次,得到了浓度大,基本无降解,蛋白质和RNA去除彻底,纯度高、质量好的核桃基因组DNA。 2.从126对引物组合中筛选出20对多态性高、条带清晰、分布均匀的引物组合用于普通核桃品种AFLP分析,共扩增出1643条电泳谱带,平均每对引物产生约82条谱带,其中1512条为多态性带,多态性比率为92.03%;其余131条谱带为所有材料共有,占7.97%。 3.从20对谱带清晰、多态性高的引物组合随机选出8对引物对核桃种间31个材料进行AFLP分析,共扩出833条电泳谱带,平均每对引物产生约102条AFLP带,其中14个条带为所有材料共有,占1.68%;其余819条均为多态性带,多态性检出率为98.32%。在核桃不同种之间AFLP标记的多态性检出率存在较大差异 4.UPGMA法对20对引物扩增的1643条谱带进行聚类分析,建立了131份供试材料的AFLP树状图,结合各样品间的遗传相似系数对其遗传多样性进行了分析,揭示了供试材料间遗传背景的相似性及复杂性,为核桃的品种鉴定和产权保护,提供了理论依据。 5.采用逐步聚类分组法,以多态性带为主要指标,结合形态分类学指标及地理来源,构建了供试品种的核心种质。 6.通过对核桃种间材料的遗传多样性进行分析,可将核桃属8个种分为4个组,黑核桃组,野核桃、吉宝核桃和心形核桃组,铁核桃、核桃楸和河北核桃组,普通核桃组。