收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

芽孢杆菌N19中性蛋白酶发酵条件及其酶学性质研究

刘东旺  
【摘要】: 中性蛋白酶是指其最适作用pH介于6.0~7.5之间的一类蛋白酶,能催化蛋白质肽键水解,具有催化反应速度快,无工业污染,催化反应条件适应性宽等独特的性质和优点。 本研究以酶工程实验室所保存的一株芽孢杆菌(Bacillus)N19为出发菌株,在摇瓶发酵水平上,对其发酵产酶条件进行了研究,确定了其最佳培养基成分及最佳培养条件。研究了不同碳源、氮源、无机盐、金属离子等因素对芽孢杆菌(Bacillus)N19产酶的影响,发现牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、NaCl浓度对产酶的影响较大。对此四因素各选取三个水平进行正交试验,确定芽孢杆菌(Bacillus)N19产酶的最佳培养基成分为牛肉膏11g/L,酵母膏12g/L,蛋白胨20g/L,NaCl 4g/L。通过摇瓶发酵试验,确定其最佳培养条件为:摇床42℃,250 r/min,发酵培养基的起始pH为4.5,接种量2%(V/V),装液量为40mL/300mL,培养44h。 芽孢杆菌中性蛋白酶在37℃发酵后,收集发酵液,经过滤、硫酸铵盐析、SephadexG-25脱盐、DEAE-纤维素-52离子强度梯度层析、Sephacryl~(TM)S-200凝胶过滤等纯化工艺分离纯化之后,经PAGE电泳鉴定得到单一条带,达到电泳纯。比活力提高到6214.7U/mg,纯化倍数为20.1倍,回收率为12.87%。 纯化的芽孢杆菌中性蛋白酶以酪蛋白为底物时的酶学性质为:最适温度70℃,在低于60℃或者高于80℃时,相对酶活力明显下降;该中性蛋白酶在50℃下作用2h,其相对酶活只有26.35%,而60℃只有3.6%,70℃下处理20分钟酶活下降至14.3%;最适pH为6.8,作用范围较宽,在pH6.0~8.0范围内均具有较高的酶活性,pH耐受性比较好;Fe~(2+)对中性蛋白酶有显著激活作用,可使其酶活提高394.65%,EDTA对酶活有一定的抑制作用;以酪蛋白为底物采用双倒数作图法测得Km为3.1×10~(-3)g/mL;SDS-PAGE电泳显示芽孢杆菌中性蛋白酶分子量37.7KDa。 本论文对芽孢杆菌发酵条件的优化、中性蛋白酶的分离纯化、酶学性质做了基础性研究,为其工业化生产打下了基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 林秀敏;陈清泉;;几种作物根结线虫病的研究及线虫致病菌—穿刺芽孢杆菌Bacillus penetrans在福建的发现[J];武夷科学;1992年00期
2 张琛;张瑛;郭峰;李春如;应明;白杨;王龙飞;;中性蛋白酶的单甲氧基聚乙二醇修饰[J];中国生物制品学杂志;2010年01期
3 蒋爱凤;胡喜巧;李兰;;米曲霉产中性蛋白酶提取与粗酶性质研究[J];河南科技学院学报(自然科学版);2011年02期
4 刘奎;枯草杆菌0031的胞外中性蛋白酶和胞外碱性蛋白酶的研究[J];浙江大学学报(理学版);1983年02期
5 刘士清,张无敌,周斌,乔敏,罗健强;提高发酵液浓度生产中性蛋白酶研究[J];云南大学学报(自然科学版);1998年02期
6 田黎,李光友;海洋生境芽孢杆菌(Bacillus spp.)的培养条件及产生的胞外抗菌蛋白[J];海洋学报(中文版);2001年04期
7 李文鹏,廖昌珑,刘士清,王佳,周建国;耐碱芽孢杆菌YNUCCTCRQ1木聚糖酶及其产生菌的系统发育分析[J];林产化学与工业;2004年04期
8 卢伟东,赵百锁,冯德芹,王磊,杨苏声;喜盐芽孢杆菌D8基因文库的构建及甘氨酸甜菜碱转运蛋白betH基因的筛选[J];微生物学报;2005年03期
9 伍欣,张晓昱,武龙;产碱性蛋白酶嗜碱芽孢杆菌的筛选及其研究[J];微生物学杂志;2005年02期
10 李卓佳;林亮;杨莺莺;林小涛;;芽孢杆菌制剂对虾池环境微生物群落的影响[J];农业环境科学学报;2007年03期
11 汤鸣强;郑挺;曾小芳;朱晓清;;酿造酱油米曲霉产中性蛋白酶提取与酶学性质研究[J];中国调味品;2008年02期
12 庄百川;陈海江;徐晓红;黄冰;贾小明;;一株产碱性磷酸酶细菌的分离、鉴定及其产酶特性研究[J];科技通报;2009年05期
13 汤鸣强;曾小芳;;米曲霉F-81菌株产中性蛋白酶的分离纯化[J];生物技术通报;2010年04期
14 赵晓瑞;谢琴;张学礼;;鸡源芽孢杆菌的分离鉴定及小鼠毒性试验研究[J];现代畜牧兽医;2010年11期
15 马延和,周培瑾,田新玉,王大珍;碱性β-甘露聚糖酶发酵工艺的研究[J];微生物学通报;1992年01期
16 袁建梅,展惠英,蒋煜峰,达文燕,陈慧;两株芽孢杆菌对玉门油田原油的降解作用[J];西北师范大学学报(自然科学版);2004年04期
17 周钰钢;魏巍;;一株耐盐芽孢杆菌的分离与鉴定[J];北京科技大学学报;2007年S2期
18 孟睿;何连生;席北斗;胡翔;栗越妍;;芽孢杆菌与硝化细菌净化水产养殖废水的试验研究[J];环境科学与技术;2009年11期
19 黄健屏,梁子超;四株昆虫病原芽孢杆菌的鉴定和毒效测定[J];微生物学通报;1980年04期
20 蔡敬民,张洁,于宙,吴克,潘仁瑞,许民生;芽孢杆菌木聚糖酶的发酵条件研究[J];工业微生物;1996年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 高传庆;潘康成;张钧利;;国外饲用芽孢杆菌的研究和应用[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(上册)[C];2010年
2 潘康成;高传庆;张钧利;范可珏;冯兴;张亚兰;;三株益生芽孢杆菌的16S rDNA测序鉴定[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(上册)[C];2010年
3 潘康成;倪学勤;方静;;BL38芽孢杆菌制剂对鸡免疫促进作用的研究[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第六次学术研讨会论文集[C];2002年
4 刘桂君;尚宏忠;;生防菌芽孢杆菌的分离鉴定与拮抗性实验[A];2010年中国菌物学会学术年会论文摘要集[C];2010年
5 魏东盛;陈云芳;刘大群;;芽孢杆菌B21及其发酵液对番茄灰霉生长的影响[A];新世纪(首届)全国绿色环保农药技术论坛暨产品展示会论文集[C];2002年
6 周燚;杨廷宪;鲁红学;赵宝海;龚天芝;;棉花内生解木聚糖类芽孢杆菌的分离与抗黄萎病研究[A];2009’环保农药新技术、新产品暨生物农药技术研讨会论文集[C];2009年
7 阿拉坦夫;张克诚;石义萍;萨日娜;;生防细菌的分离鉴定的研究简报[A];第四届中国植物细菌病害学术研讨会论文集[C];2008年
8 黄昌华;成国英;李建洪;邱玉兰;刘晟;;一株具有生防潜力的芽孢杆菌——B-HCH[A];全国生物防治学术讨论会论文摘要集[C];1995年
9 索雅丽;郭荣君;李世东;;芽孢杆菌B006脂肽类抗生素的拮抗特性及其在辣椒根际的检测[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
10 郭荣君;侯著贤;李世东;;载体和助剂对芽孢杆菌B006和BH1菌体存活的影响[A];粮食安全与植保科技创新[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 丁延芹;固氮芽孢杆菌的分离、鉴定及其glnB基因的初步研究[D];中国农业大学;2004年
2 高卫华;芽孢杆菌胞外蛋白酶合成及抑菌功能的调控机制研究[D];南开大学;2010年
3 焦凌霞;DnaK基因调控酸土脂环酸芽孢杆菌嗜酸耐热生理特性研究[D];西北农林科技大学;2012年
4 林玲;内生芽孢杆菌及抗菌物质的鉴定和对作物黄萎病的防治效果[D];南京农业大学;2009年
5 齐海萍;豆豉纤溶酶的制备、酶学特性及功能性质研究[D];江南大学;2004年
6 于明超;芽孢杆菌和中草药在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)饲料中的应用研究[D];中国海洋大学;2007年
7 范晓丹;新型纤溶酶得产生菌选育、发酵优化及酶学性质研究[D];华南理工大学;2006年
8 易晓华;除虫菊内生真菌分离、鉴定及其代谢产物抑菌活性研究[D];西北农林科技大学;2008年
9 孟凡欣;埃博霉素高产菌株选育、发酵条件优化及抗肿瘤活性研究[D];吉林大学;2009年
10 陈云松;转鲑鱼降钙素基因酵母的发酵条件优化及安全性评价[D];中国海洋大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘东旺;芽孢杆菌N19中性蛋白酶发酵条件及其酶学性质研究[D];河北农业大学;2008年
2 张健红;芽孢杆菌WSHB04-02发酵法生产碱性果胶酶研究[D];江南大学;2005年
3 吴金光;两种硅酸盐细菌特异性PCR方法的建立及应用[D];浙江理工大学;2010年
4 陈旭东;果寡糖和芽孢杆菌对断奶仔猪生产性能的影响及其机理[D];中国农业大学;2004年
5 许波;中性蛋白酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达[D];云南师范大学;2004年
6 王慧萍;拮抗性芽孢杆菌F53抑制茄子黄萎病菌(Verticillium dahliae)的研究[D];南京师范大学;2005年
7 刘燕;猪益生性芽孢杆菌的筛选与特性研究[D];中国农业科学院;2006年
8 秦玉花;高产木聚糖酶芽孢杆菌的分离筛选及其酶性质研究[D];四川农业大学;2006年
9 刘铭;几株芽孢杆菌对杀虫苏云金杆菌菌株的增效作用研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2002年
10 刘振杰;苯乙醇胺手性合成的研究[D];华南热带农业大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王伟;用芽孢杆菌自溶素构建细菌表面展示体系及锚定机制的研究 获2006年国家自然科学基金研究计划项目[N];科技日报;2007年
2 柯继;芽孢杆菌用于龙眼保鲜获成功[N];中国食品报;2009年
3 陆敬雷李春宁 记者 苏彤晖;新沂生物农药芽孢杆菌AR156制剂项目启动[N];徐州日报;2007年
4 ;蛋白酶[N];中国畜牧兽医报;2008年
5 科信;新型抗根结线虫病生物农药问世[N];中国县域经济报;2007年
6 辛闻;根结线虫病有了“克星”[N];江苏农业科技报;2007年
7 记者 张晔 通讯员 辛闻;新型抗“根结线虫病”生物农药问世[N];科技日报;2007年
8 通讯员 胡必强;新农药将让市民吃上放心菜[N];江苏科技报;2007年
9 王道坤;畜禽养殖选用微生态制剂三原则[N];江苏农业科技报;2006年
10 河北省水产技术推广站 提供;雨季水产养殖管理要点[N];河北农民报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978