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AIF-1在肝细胞癌中的表达的临床意义及其对肝癌细胞细胞生物学行为的影响

张起帆  
【摘要】:HCC是原发性肝癌里最常见的类型,尽管HCC的治疗手段在不断完善,但目前这些治疗手段仍然存在缺陷,HCC的治疗效果仍不能让人满意,HCC的病死率仍然非常高。因此,继续寻找新的、可能有效的诊断和监测的标志物,继续探寻HCC发展的分子机制,从而为HCC病人找的新的治疗靶点显得十分重要。近年来,不断有学者发现炎症与癌症之间存在密切的分子联系,目前已经被发现的与肝脏恶性肿瘤的发展与发生的炎症细胞因子包括IL-1、IL-6、TNF-α 等。AIF-1是一个主要由外周血单核细胞和组织内的巨噬细胞产生,具有调节炎症反应的作用的炎症因子。有研究指明,AIF-1参与了类风湿性关节炎、炎症性皮肤紊乱、系统性硬化病的炎症反应调节。最近有学者发现,AIF-1体外实验中能促进乳腺癌细胞的增殖和迁移,说明AIF-1可能参与到乳腺癌的发展中去。AIF-1还在肝血窦边界的活化Kupffer细胞中被检测出来,提示AIF-1在肝脏的淋巴细胞系统中也有表达。因而我们推测AIF-1也可能参与了肝癌发展中去。但目前AIF-1的表达与HCC的发生和进展之间的联系还不明确,AIF-1的表达对HCC病人是否存在检测和诊断意义还不清楚。本研究的主要目的是通过使用免疫组织化学技术、蛋白免疫印迹技术来评估配对的104例HCC标本与周围的正常肝组织标本中AIF-1的表达差异,并且研究AIF-1的表达是否与HCC病人的临床病理指标相关。我们进一步进行了体外细胞实验,通过使用细胞增殖试验、损伤修复试验、Transwell迁移试验来评估AIF-1对HCC细胞增殖、迁移能力的影响,以此来探讨AIF-1与HCC进展之间的关系。本研究的主要研究结果如下:1.AIF-1在人HCC组织中表达增多我们先后使用免疫组织化学技术、WB及qPCR技术,检测配对HCC组织和周围正常肝组织中检测AIF-1蛋白含量。与周围正常肝组织相比,HCC组织中AIF-1蛋白和mRNA的表达明显升高。这些结果提示AIF-1在HCC组织中的表达明显上调。2.AIF-1的表达与HCC病人临床病理学特征之间的联系为了评估AIF-1在HCC组织中表达的意义,我们进一步研究AIF-1的表达与HCC病人临床病理学特征之间的关系。根据数据处理结果,我们发现在肿瘤体积直径大于5cm、或存在多个(多于2个)结节样病灶的、BCLC分期B-C期、合并门静脉癌栓的原发性肝癌病人中,AIF-1的表达显著升高。这一结果提示AIF-1可能与肝细胞癌的进展相关。3.AIF-1对在HCC细胞系细胞增殖的影响我们使用si-RNA技术成功构建了 AIF-1表达沉默细胞。然后使用CCK-8试验检测AIF-1沉默细胞的增殖能力。数据分析显示,AIF-1沉默的肝癌细胞相对于对照组的细胞,其增殖能力显著抑制。这些研究结果提示,AIF-1可能在HCC细胞的增殖中起到一定的作用。4.AIF-1对在HCC细胞系细胞迁移的影响在体外细胞划痕实验试验中,我们发现被siRNA转染后AIF-1表达沉默的两种肝癌细胞相比于对照组的细胞,其细胞迁移能力显著降低。我们进一步做了transwell试验,在transwell试验中,AIF-1表达沉默的两种肝癌细胞相比于对照组的细胞,其细胞迁移进下层transwell室的能力明显减弱。结合上述的实验,我们有理由相信,AIF-1的高表达可能与人类HCC细胞的转移能力相关。


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