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耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌同源性分析及传播机制研究

黄亚雨  
【摘要】:背景肺炎克雷伯菌是肠杆菌科中的最常见的细菌之一,也是医院内和社区感染的重要致病源。近年来临床上检出多重耐药肺炎克雷伯菌日益增多,而碳青霉烯类抗生素是治疗多重耐药肺炎克雷伯菌的最常用的抗生素之一,因此肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素耐药率也逐年提高。然而不同国家和地区间耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌流行病学特征存在较大差异,因此通过研究此类耐药菌株的同源性及其传播机制,对控制本地区菌株耐药性传播扩散具有重要意义。目的通过系统的收集及研究我院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的临床分布特征及耐药性传播机制,为临床治疗此类菌株引起的感染及控制耐药性的传播提供初步的实验室依据。方法采用WHONET软件收集2012-2017年由莆田学院附属医院临床分离的肠杆菌科细菌资料及分析。采用法国梅里埃VITEK 2-compact分析仪进行菌株鉴定和药敏试验,改良Hodge试验和EDTA协同试验检测耐药表型,ERIC-PCR法及MLST法进行同源性分析及分子分型。PCR法扩增检测碳青霉烯酶基因和膜孔蛋白基因,采用菌株耐药性接合实验对细菌的质粒进行转移,使用质粒提取试剂盒对接合实验成功的接合子进行质粒提取,采用PCR法扩增检测质粒DNA的碳青霉烯酶类基因。采用PCR法对接合实验成功的供体菌插入序列ISCR1、ISEcp1、IS2、IS26及Ⅰ类整合子基因int11、int12、int13等周围可移动元件进行检测。结果2012-2017年共收集到肠杆菌科9968株,分离出来的肠杆菌主要以肺炎克雷伯菌为主,共有5596株,占56.1%(5596/9968)。进一步统计分析显示耐碳青霉烯类的肠杆菌有1326,其中肺炎克雷伯菌1276株,占96.47%(1276/1326)。本研究选取的33株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌细菌药敏检测显示除了米诺环素外,对其他15种抗生素的耐药率均在70%以上;耐药表型结果显示32株改良Hodge试验结果阳性和1株EDTA协同试验阳性;ERIC-PCR法及MLST法结果显示29株为ST11/A型,2株ST15/B型、ST11/C和ST2193/D各1株,经PCR扩增法检测结果显示32株携带KPC基因,30株携带SHV基因,1株携带NDM-1基因,1株ompk35膜孔蛋白基因缺失和3株ompk36膜孔蛋白基因缺失未检测出VIM、IMP、OXA-48、GES、GIM等其他耐药基因;。细菌耐药性接合实验结果显示33株受试菌株有1株接合实验成功,PCR法扩增供体菌和接合子质粒结果均为NDM-1基因阳性。未检测到供体菌的插入序列ISCR1、ISEcp1、IS2、IS26和Ⅰ类整合子基因int11、int12、int13等周围可移动元件存在。结论本院耐碳青霉烯类肠杆菌以肺炎克雷伯菌为主,且对多种β-内酰胺类抗生素耐药,耐药机制以产KPC酶为主,分子分型以ST11型为主,主要流行株为A克隆群,同源性程度高。1株肺炎克雷伯菌耐药性接合实验成功,进一步研究显示该菌株耐药性接合成功主要由质粒介导完成,未发现插入序列ISCR1、ISEcp1、IS2、IS26及Ⅰ类整合子基因int11、int12、int13参与。


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