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植物乳杆菌、两歧双歧杆菌联合丹参多糖对非酒精性脂肪性肝病的防治作用及机制研究

王为  
【摘要】:研究背景:非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指无过量饮酒史,以肝实质细胞出现弥漫性脂肪浸润、堆积为特征的慢性病。益生菌和中药均可调节肠道微生态、降低胆固醇水平。丹参多糖是从中药丹参中提取的一类天然高分子化合物,具有抗炎、免疫调节、抗氧化和抗衰老等生物学功能,但其能否增强益生菌对NAFLD的改善作用尚不明确。目的:1.从健康人肠道微生物中筛选出对降胆固醇和甘油三酯清除能力强的益生菌。2.探讨益生菌联合丹参多糖对NAFLD小鼠脂质代谢紊乱和肝脏病理学损伤的保护效果。3.探讨益生菌联合丹参多糖干预对NAFLD小鼠炎症反应、肠道菌群和肠粘膜屏障完整性的影响及可能机制。方法:1.从20名健康人粪便样本中分离菌株,分别检测降胆固醇和甘油三酯的效率,并对具有较好降脂能力的候选菌株进行一系列模拟人消化液环境的实验,进一步筛选,并使用16S rDNA测序技术鉴定。2.将小鼠随机分为正常饮食组(ND)、高脂饮食组(HFD)、益生菌组(LB)和益生菌联合丹参多糖组(LBM),ND组和HFD组灌胃生理盐水,LB组降脂益生菌灌胃,LBM组益生菌联合丹参多糖。3.计算Lee's指数和肝指数,血生化检测血脂指标。4.HE染色检测肝脏和小肠病理。5.ELISA和qRT-PCR检测血清和肝脏炎性因子含量。6.用qRT-PCR及Western blot检测脂代谢相关因子、TLR4/NF-κB、PI3K/Akt/mTOR等表达水平。7.运用16S rDNA测序技术,分析各组肠道菌群组成、物种丰度差异。8.运用HPLC法检测粪便短链脂肪酸的浓度。结果:1.植物乳杆菌和两歧双歧杆菌降TC和TG能力较强,且对模拟的人体消化液环境有耐受能力。2.HFD组Lee's指数、肝指数、血脂水平、LPS、炎性因子显著增加。LB和LBM干预能显著降低上述指标。3.HFD组肝组织可见明显肿胀、脂肪变性和炎性细胞浸润,LB和LBM干预能改善肝组织病理损伤,且LBM组干预更显著。4.HFD组脂代谢相关因子显著性降低,LB和LBM能够有效逆转其表达改变且LBM组干预更显著。5.HFD组肝脏TLR4/NF-κB表达量显著性升高。LB和LBM组能够显著性改善其升高,且LBM组改善更显著。6.HFD组肝脏PI3K/Akt/mTOR通路激活。LB和LBM组能够显著性减弱PI3K、Akt及mTOR磷酸化水平,抑制通路的激活,且LBM组作用更明显。7.HFD组肠道中拟杆菌门、乳酸菌属和双歧杆菌属丰度降低,而厚壁菌门和变形菌门丰度上升,LB和LBM扭转其表达丰度,且LBM组干预效果更好。8.HFD组粪便中丁酸和乙酸含量显著性降低,LB和LBM干预提高了NAFLD粪便中丁酸和乙酸含量,且LBM组干预效果优于LB组。9.HFD组肠道ZO-1和Occludin mRNA和蛋白表达降低,LB和LBM组表达升高,且LBM组变化最明显。结论:植物乳杆菌、两歧双歧杆菌联合丹参多糖可明显改善NAFLD小鼠肝功能并能降低血脂。这与其能够抑制肝脏TLR4/NF-κB通路激活、抑制PI3K/Akt/mTOR通路活化,调控肠道菌群组成、短链脂肪酸生成和提高肠道粘膜屏障功能有关。


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