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整体柱材料的制备及其在生物分离分析中的应用

罗权舟  
【摘要】: 整体材料的制备是近年来发展起来的一种新型色谱填料合成技术,它具有制备过程简单、重复性好、易于改性、柱压低以及传质速度快等优点,是当前色谱研究的一大热点。 本文以聚甲基丙烯酸缩水甘油酯整体材料为基质,制备了蛋白A和模拟生物特异性亲合整体柱,分别将其用于样品中免疫球蛋白G(IgG)的快速分离分析及血浆中过量IgG的清除,并考察了上样液的pH值及缓冲盐体系对IgG在模拟生物特异性亲合整体柱上吸附的影响。 以相同的整体材料为基质,合成了亚胺二乙酸(IDA)型金属螯合亲合整体柱,考察了温度和反应时间对IDA键合量的影响,将螯合了三种不同金属离子的IDA型亲合整体柱用于蛋白的分离,研究了流动相pH值对BSA在Cu~(2+)-IDA亲合柱上吸附量的影响,用IDA裸柱从鸡蛋清中一步分离得到溶菌酶,并用Cu~(2+)-IDA亲合柱对药用HSA注射液进行纯化。 合成了二乙基氨基乙基(DEAE)弱阴离子交换整体柱。考察了流速对蛋白在DEAE离子交换整体柱上突破曲线、吸附等温线及分离的影响,研究了流动相的组成和pH值对蛋白保留的影响。 制备了以整体材料为载体的固定化木瓜蛋白酶生物反应器,提出了高效亲合色谱法研究木瓜蛋白酶酶解人IgG反应的新方法。采用蛋白A亲合整体柱考察了反应条件,包括温度、反应时间以及pH对木瓜蛋白酶酶解人IgG效率的影响。


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