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微透析—高效液相色谱法研究金属离子与生物大分子相互作用

郭明  
【摘要】: 微透析法是一种新型生物采样和分离技术,在神经学、生理学、药理学以及行为学等多个生命科学领域得到了广泛应用。 本文提出采用微透析一高效液相色谱法研究金属离子与生物大分子的相互作用。通过实验证明本方法可以用来测定金属离子与人血清白蛋白的结合常数和结合位点数。该方法具有简便、快速以及准确等优点。 利用这种方法研究了多种金属离子在血清白蛋白上共同结合位点的竞争结合。比较了金属离子在共同结合位点上的相对结合强度,证明Cu(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)、Ni(Ⅱ)和Cd(Ⅱ)在HSA和BSA上都有一个共同的第二结合位点,并获得了以上几种金属离子在这一位点的相对结合强度顺序。实验结果表明这些金属离子在HSA和BSA上的结合强度顺序有所不同。 利用本方法研究了金属离子与金属酶的相互作用。定量研究了金属离子及其氨基酸配合物与铜锌超氧化物歧化酶(Cu_2Zn_2SOD)活性中心Cu(Ⅱ)和Zn(Ⅱ)的相互作用,以及这些物质与脲酶(Urease)活性中心Ni(Ⅱ)的相互作用。实验表明这些金属离子可以不同程度地诱导和顶替金属酶活性中心的金属离子,形成了部分金属衍生酶和脱辅基酶。根据作用后酶的活性变化与活性中心离子含量的关系,提出了一种可以预测金属衍生酶是否具有活性的方法。


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