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多分离模式/电喷雾质谱联用方法发展及相关基础研究

梁振  
【摘要】:质谱(MS)不仅能够提供大量可靠的样品结构信息和较高的检测灵敏度,而且也具有快速定性的能力。特别是电喷雾离子化(ESI)接口的出现,使质谱能够在小的质荷比(m/z)范围内测定大分子量的蛋白质。此外,利用该接口还可以实现质谱与液相色谱(LC)、毛细管电泳(CE)、毛细管电色谱/加压毛细管电色谱(CEC/pCEC)等分离技术的联用,从而拓宽其应用范围。 本论文以ESI-MS 为主体,对分离联用技术中电喷雾的喷雾溶液体系进行了综合考察,得到了描述溶质在质谱上的信号强度与缓冲溶液酸度和溶液离子强度关系的理论表达式。同时通过设计LC-ESI-MS、pCEC-ESI-MS 等实验,证明了优化缓冲溶液的酸度及离子强度可以显著提高联用系统的检测灵敏度。 系统地考察了CE-ESI-MS 联用过程中的各种参数的影响,并且利用膜技术发展了新型的接口技术。结果表明,该接口能够拓宽联用系统缓冲盐体系的选择范围,从而有利于改善峰形、提高检测灵敏度。 利用四通接口实现了pCEC 与ESI-MS 的在线联用。通过对各种影响因素的系统考察,在最佳条件下对细胞色素c 的胰蛋白酶水解产物进行了分析定性。首次利用pCEC-ESI-MS 对蛋白质进行了分离检测,同时利用自行发展的柱上浓缩技术,将蛋白质的检测灵敏度提高了20~100 倍。 建立了液相色谱-质谱联用分析定性灯盏花乙素、褪黑激素和单糖的方法。此外,利用六通阀构建了二维液相色谱-质谱分析平台,对耐药性和不耐药性白血病细胞蛋白组进行了初步分析,分别鉴定出了224 种和156 种蛋白质。


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