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牙鲆雌核发育分析鉴定与性别决定机制研究

徐成  
【摘要】: 本研究应用同工酶和随机扩增多态性DNA(RAPD)方法,分析了牙鲆野生种 群和雌核发育群体的遗传多样性和遗传分化水平;应用RAPD方法对比分析了雌 核发育牙鲆的亲鱼和子代DNA样品;采用PCR扩增牙鲆SRY同源片段并进行了序 列分析;将RAPD扩增产物中性别连锁DNA片段克隆与测序。主要结果有: 1.牙鲆雌核发育群体同工酶的Ldh-C,Cat两个基因座位发生了重组,基因座位 与着丝点之间的重组率分别为52.6%和29.8%;雌核发育群体RAPD分析发现136 个DNA片段中有22个发生基因分离,但由于研究方法的局限,不能确定是否 发生基因重组。 2.牙鲆雌核发育群体的同工酶多态座位比例和平均杂合度分别为6.90%和 0.0350;研究中提出了RAPD遗传多样性参数修正算法;野生种群RAPD多态片 段比例37.57%,多态座位比例20.88%,平均杂合度0.0852;雌核发育群体RAPD 多态片段比例16.18%,多态座位比例8.98%,平均杂合度0.03898。同工酶与 RAPD方法得出结果基本一致。 3.牙鲆雌核发育群体与野生群体之间的RAPD遗传相似度I=0.9036,遗传距离 D=0.1014,已超过一般鱼类地理种群之间的遗传距离值。雌核发育群体的遗 传多样性指数(H_o=7.1982)远低于野生群体(H_o=28.0986)。雌核发育 野生群体H_(pop)/H_(sp)=0.9716,(H_(sp)-H_(pop))/H_(sp)=0.0284,表明97.16%的遗传多 样性是由群体内不同个体间的差异造成的,只有2.84%遗传多样性与群体间分 化有关。 4.分析过同工酶多态座位比例、同工酶平均杂合度、RAPD多态片段比例、RAPD 多态座位比例、RAPD平均杂合度、群体遗传多样性指数H_o等遗传多样性参数, 牙鲆雌核发育群体各参数比野生群体减少55.39%-77.74%,说明它的遗传多 样性严重损失。 5.采用RAPD对照分析亲本与雌核发育子代胚胎的DNA样品。结果表明,雌鱼有、 雄鱼无的基因,雌核发育子代表达:雌鱼无、雄鱼有的基因,雌核发育子代不 表达,正常受精二倍体对照组表达正常。证明牙鲫雌核发育子代的遗传物质来 自母本,雌核发育诱导使用的精子经过紫外线灭活后,遗传物质己被破坏,其 携带的遗传信息没有传给子代,在DNA水平证明了雌核发育诱导方法和结果的 可靠性。 6.进行了牙怦性别决定机制研究。PCR分析了哺乳动物性别决定基因SRY同源片 段在牙鲫的表达情况。扩增产物均无个体差异,也没有性别差异。将扩槽产物 中信号最强的sry七片段测序,其648bn序列与人SRY基因相应的419bn片段 进行了同源性分析,两者同源性为35%,同源性很低,只有随机的碱基重合。 由于牙鲫 SRY PCR扩增带没有全部分析,不能肯定牙鲫没有 SRY同源片段。RAPD 分析确定3个引物的4条扩增片段与性别相关,分别克隆、测序,5134和5145-S 两个片段得到了完整序列。


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