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对虾白斑综合症抗病力指标的筛选及其应用的研究

姜国建  
【摘要】:近年来,中国迅速发展的海水养殖业面临着病害和养殖环境退化等诸多问 题的困扰,其中对虾养殖业受到白斑综合症病毒(WSSV)的冲击很大。本文针 对这一问题,系统研究了对虾在白斑综合症病毒感染和环境因子胁迫下先天性免 疫因子的动态变化过程,筛选出了能够准确反映对虾健康状况的免疫因子,进而 将其运用到对虾抵抗 WSSV 的机制和环境胁迫对对虾健康状况的影响的研究中。 在对现有文献进行全面综述的基础上,我们通过实验系统比较了中国对虾 和日本对虾在摄食感染 WSSV 后的死亡率、免疫学因子和感染病毒的变化情况, 以及在氨氮胁迫下对虾感染 WSSV 过程中免疫学因子的变化情况。根据各种免 疫学因子的变化情况,从中筛选出与 WSSV 感染直接相关的免疫学因子,并优 选出一氧化氮合成酶(NOS)作为反映对虾抗病力的重要指标,它直接反映出了 两种对虾对白斑综合症病毒抵抗能力的差异,应当是导致其对 WSSV 敏感性差 异的主要原因之一。其水平也受氨氮胁迫的影响。 在此基础上,我们建立了对虾血细胞中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的 鉴定方法—硝基四氮唑蓝(NBT)还原法和血细胞形态法以及酶活力的测定方法 —L-瓜氨酸分析法和亚硝酸盐分析法并优化了鉴定和测量条件,结果显示: 对虾 血细胞在 4oC 下与 L-精氨酸和 LPS 孵育 8h 以及当 L-精氨酸浓度为 2.5mmol l-1, LPS 浓度为 100μg ml-1,Ca2+浓度为 2.5mmol l-1 时,iNOS 活力的测定结果最佳。 我们通过NBT还原法和血细胞形态法在中国对虾和日本对虾血细胞中鉴定 到了iNOS,并通过亚硝酸盐法和L-瓜氨酸法对比研究了感染WSSV后这两种对虾 血细胞中iNOS的变化情况,结果显示:在WSSV感染初期,WSSV可以诱导中国 对虾和日本对虾产生iNOS,且日本对虾比中国对虾的iNOS更容易被LPS所诱导。 此后随着病毒的增殖,iNOS活性显著降低,对虾也趋于死亡。iNOS活力的差异 可能是日本对虾较中国对虾对WSSV的抵抗力强的原因之一。 本文在系统比较两种对虾感染WSSV病毒过程中抗病力指标变化的基础上, 优选出与WSSV感染直接相关的抗病力指标,并首次对对虾的一氧化氮合成酶进 行了系统的研究,所得到的结果为深入了解对虾对白班综合症病毒的抗病力机制, 并建立和发展相应的病害防御措施提供了科学依据。


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