收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

扇贝丝氨酸蛋白酶及其抑制剂基因的克隆与表达

朱玲  
【摘要】:扇贝是我国海水养殖的重要品种,但自1994年以来,养殖扇贝陆续爆发的大规模死亡,不但造成了巨大的经济损失,而且直接威胁到现有产业的生存和发展。引起扇贝大规模死亡原因是多方面的,其主要原因是养殖环境恶化、扇贝种质衰退和抗病力下降。因此,在积极调整产业结构、加强环境治理、开展扇贝病原及流行病学研究的同时,深入研究扇贝免疫防御机制,探讨提高机体抗病力的有效途径和方法,改良种质和培育抗病品系,无疑是解决目前困扰扇贝养殖业健康可持续发展的必经之路。 丝氨酸蛋白酶及其抑制因子在无脊椎动物的免疫应答中起着核心作用,它们的协同作用不但直接导致免疫信号转导和级联放大,还可激活特异性防御体系,如黑化反应、血液凝结和抗菌肽的合成等。本研究采用大规模EST测序方法,结合cDNA末端快速扩增技术,直接从cDNA文库中分离、克隆了9个扇贝免疫相关的丝氨酸蛋白酶及其抑制剂基因的全长cDNA序列,应用Northern blotting和RT-PCR方法检测了这些基因的组织定位及在损伤和不同类型微生物感染下的表达规律。 栉孔扇贝丝氨酸蛋白酶基因CFPS1和CFPS2的cDNA全长分别为1211-bp和1152-bp,分别编码354和336个氨基酸,均为具有信号肽执行胞外功能的分泌蛋白。两个基因结构相似,在成熟肽中,氨基端的clip结构域(clip domain)都由37个氨基酸残基组成,六个形成二硫键的保守半胱氨酸的排列顺序与大环卫素的半胱氨酸排列顺序相似。羧基端是典型起催化作用的丝氨酸蛋白酶结构域(Tryp_SPc domain),活性部位催化三联体(H、D、S)和六个形成二硫键的半胱氨酸非常保守。两个结构域之间通过连接区域相连。CFPS1和CFPS2都以酶原形式存在,以类似于胰蛋白酶原激活方式被特异性的蛋白水解酶切。应用Northern blotting方法检测CFPS1和CFPS2基因在不同组织或器官中的表达发现,两个基因都主要在血细胞中表达。用RT-PCR检测CFPS1和CFPS2基因在损伤、不同类型微生物感染后的表达显示,损伤和鳗弧菌感染可以诱导CFPS1基因的表达,在两种刺激后16小时,CFPS1基因表达明显升高; 同样鳗弧菌感染也可以诱导CFPS2基因的表达,感染16小时后,CFPS2基因的表达也明显升高,但溶壁微球菌和巴氏毕赤酵母感染对CFPS2基因的表达差异不显著。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 ;扇贝[J];农民科技培训;2002年12期
2 林晓凤,李贇;海湾扇贝和栉孔扇贝的组织病理学观察[J];海洋湖沼通报;2002年02期
3 王宜艳;孙虎山;;人工养殖栉孔扇贝和海湾扇贝血淋巴中部分免疫因子的比较研究[J];水产科学;2005年12期
4 李志坚;招远县大力发展扇贝养殖[J];科学养鱼;1986年06期
5 陈怀定;方彰胜;黄培铃;张兵;;两种扇贝病害的ELISA分析[J];河北渔业;2006年02期
6 王克洪;莱州湾新海区扇贝养殖技术试验[J];中国水产;1988年06期
7 石芳芳;李成华;宋林生;赵三军;陈慕雁;;用流式细胞仪测定扇贝血细胞吞噬活性[J];生物技术通报;2006年S1期
8 高悦勉;孙洋;才慧梅;;3种扇贝遗传结构的RAPD分析[J];海洋水产研究;2007年06期
9 郑绵雄;;异国优种进我省 水产养殖添新花——海湾扇贝人工育苗在河北省获得成功[J];河北渔业;1987年02期
10 马英杰;海湾扇贝种质退化及其对策探讨[J];海洋科学;1992年06期
11 谢忠明;;我国引进美国海湾扇贝获得成功[J];海洋开发与管理;1986年03期
12 刘小林,常亚青,相建海,李富花,宋坚,丁君,董波,刘宪杰;栉孔扇贝不同种群杂交效果的初步研究 Ⅰ.中国种群与俄罗斯种群的杂交[J];海洋学报(中文版);2003年01期
13 燕敬平,孙慧玲,方建光;我国海湾扇贝养殖现状、问题与发展对策[J];海洋水产研究;2000年03期
14 郇聘;张晓军;李富花;张洋;赵翠;刘保忠;相建海;;一种栉孔扇贝丝氨酸蛋白酶基因的染色体定位及其内部SNP的研究[J];遗传;2009年12期
15 杨秀生;王勇强;叶海斌;朱安成;张伟;于晓清;许拉;;扇贝常见病害种类及其流行趋势和防控[J];齐鲁渔业;2008年09期
16 鲁传西;;中科院海洋研究所海湾扇贝引种、育苗、养殖研究及应用课题获得新进展[J];现代渔业信息;1991年07期
17 吕隋芬;王如才;;细胞松驰素B诱导栉孔扇贝产生三倍体的研究[J];海洋湖沼通报;1992年02期
18 宋庆云,罗挽涛,王文兴,薛清刚;扇贝的养殖环境及其体内的细菌学分析[J];黄渤海海洋;1997年03期
19 马莹,刘海映;温度对海湾扇贝性腺发育的影响[J];水产科学;1994年05期
20 游克仁;丁勇;;海湾扇贝养成技术(二)[J];农村实用工程技术;1995年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孔晓瑜;刘亚军;喻子牛;宋林生;;栉孔扇贝和海湾扇贝线粒体16S rRNA基因片段的比较研究[A];贝类学论文集(第Ⅸ辑)[C];1999年
2 胡丽萍;黄晓婷;包振民;;C_0 t-1 DNA在栉孔扇贝,虾夷扇贝和海湾扇贝染色体上的定位及比较分析[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
3 孔晓瑜;刘亚军;喻子牛;宋林生;;栉孔扇贝和海湾扇贝线粒体16S rRNA基因片段的比较研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学分会第五次代表大会暨第九次学术讨论会论文集[C];1999年
4 宋林生;胥炜;李红蕾;郭希明;相建海;;海湾扇贝cDNA文库构建及EST分析[A];甲壳动物学分会成立20周年暨刘瑞玉院士从事海洋科教工作55周年学术研讨会论文(摘要)集[C];2002年
5 孙福新;王颖;吴志宏;;栉孔扇贝对铜的累积与排出特征研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
6 宋林生;;扇贝生物抗病功能基因的克隆表达与应用[A];中国海洋生化学术会议论文荟萃集[C];2005年
7 于宗赫;;海州湾深水区域两种养殖方式栉孔扇贝生长与免疫特征的比较[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
8 李娟;李莉;张国范;;海湾扇贝(Argopecten irradians)两种过氧化物还原酶基因的克隆和结构的研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
9 王春德;刘保忠;李继强;刘升平;;紫扇贝与海湾扇贝种间杂交的研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
10 邸炜鹏;王昭萍;于瑞海;张晨晨;;栉孔扇贝剥离卵的体外促熟研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 朱玲;扇贝丝氨酸蛋白酶及其抑制剂基因的克隆与表达[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2006年
2 王玲玲;栉孔扇贝和海湾扇贝遗传连锁图谱的构建研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
3 王波;扇贝丝氨酸蛋白酶抑制剂基因CfKZSPI及Aikunitz的克隆与重组表达[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2008年
4 李娟;海湾扇贝抗氧化相关基因的克隆、表达和结构分析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
5 林听听;栉孔扇贝(Chlamys farreri)血细胞酶联免疫检测试剂盒的研制与应用[D];中国海洋大学;2011年
6 郭琳;海湾扇贝Myostatin研究及其单核苷酸多态性分析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2012年
7 刘保忠;海湾扇贝群体遗传学和扇贝科分子系统演化的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2003年
8 高强;栉孔扇贝与海湾扇贝免疫学比较研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2007年
9 张明亮;栉孔扇贝生理活动对近海碳循环的影响[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
10 赵建民;扇贝大防御素和G型溶菌酶的基因克隆与重组表达[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵芙钗;栉孔扇贝和海湾扇贝的生殖腺的基本营养成分分析及其多糖的免疫活性测定[D];中国海洋大学;2012年
2 胥炜;海湾扇贝和栉孔扇贝EST分析及C型凝集素基因的克隆与分析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2004年
3 吴龙涛;扇贝免疫相关因子基因的克隆与表达分析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2004年
4 石芳芳;栉孔扇贝和海湾扇贝免疫防御特性的比较研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2006年
5 贺桂珍;养殖扇贝类立克次氏体和病毒性病原研究[D];中国海洋大学;2003年
6 王斌;γ-氨基丁酸对栉孔扇贝免疫防御的影响[D];鲁东大学;2012年
7 邸炜鹏;氨海水与5-羟色胺对栉孔扇贝解剖卵体外促熟作用的研究[D];中国海洋大学;2010年
8 张蕾;栉孔扇贝、海湾扇贝热休克蛋白22基因的克隆和表达及其与栉孔扇贝抗热性状相关SNP位点的筛查[D];中国海洋大学;2009年
9 赵美丽;栉孔扇贝对石油烃蓄积及响应的初步研究[D];国家海洋局第一海洋研究所;2011年
10 秦贞奎;栉孔扇贝(Chlamys farreri)性别分化相关基因的筛选以及两个相关基因的表达分析[D];中国海洋大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 通讯员 陈悦 宏伟 宋辉 YMG记者 申吉忠;野生栉孔扇贝长岛再次现身[N];烟台日报;2010年
2 晓梅;栉孔扇贝杂交苗繁育及养殖技术通过验收[N];中国渔业报;2010年
3 王京宝;扇贝将缺货五十万吨[N];农民日报;2003年
4 通讯员 刘洋记者 王建高;海湾扇贝国家标准发布[N];科技日报;2008年
5 通讯员 邢桂方 记者 王建高;首个“中科红”海湾扇贝南移成功[N];科技日报;2005年
6 王丽;怎样提高海湾扇贝孵化率[N];中国海洋报;2002年
7 孟庆良;海湾扇贝养殖与加工[N];中国渔业报;2007年
8 本报记者 缪翼;青岛贝复苏以改良品种为契机[N];中国渔业报;2009年
9 李明;美洲帘蛤有望替代栉孔扇贝[N];中国海洋报;2002年
10 任德建;引起栉孔扇贝死亡的是球形病毒[N];中国渔业报;2004年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978