收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

中华绒螯蟹(Eriocheir Sinensis)Peroxiredoxin 6和Thioredoxin 1基因的克隆及表达

母昌考  
【摘要】: 中华绒螯蟹是我国重要的水产经济动物,近年来养殖规模不断扩大,产量持续增加。但是,伴随着养殖规模的扩大,养殖环境也日益恶化并导致了大量疾病的发生,严重制约了中华绒螯蟹养殖业的健康发展。因此,疾病预防和控制对中华绒螯蟹养殖业的可持续发展具有举足轻重的作用。与其他无脊椎动物一样,中华绒螯蟹的免疫系统没有免疫球蛋白和淋巴细胞,而是依靠由细胞免疫和体液免疫构成的固有免疫系统来对病原进行识别和清除。中华绒螯蟹的固有免疫机制的研究有助于推动中华绒螯蟹病害防治工作的开展。 本研究采用大规模EST测序方法,结合末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术从中华绒螯蟹血淋巴中克隆到了过氧化物还原酶(peroxiredoxin,EsPrx6)和硫氧还蛋白(thioredoxin,EsTrx1)基因的cDNA全长序列;采用实时荧光定量PCR技术检测了这两个基因在健康个体中表达的组织分布情况以及鳗弧菌刺激后血淋巴细胞中的时序表达规律;同时,将这两个基因的编码区克隆到pET系列载体,并在大肠杆菌中实现了重组表达,并进行了体外活性检测。 过氧化物还原酶是一个抗氧化蛋白超家族,在保护机体免受活性氧(reactive oxygen species,ROS)的伤害中发挥着重要作用。中华绒螯蟹Prx6(EsPrx6)基因的cDNA全长为1076 bp,5` UTR(untranslated region,UTR)为69 bp,3` UTR为347 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)为660 bp,编码219个氨基酸的蛋白。mRNA 3`-端具有多聚腺苷酸加尾信号(polyadenylation signal)AATAAA和polyA尾巴。EsPrx6的预测分子量为24 kDa,理论等电点为6.21,具有一个保守的Prx结构域、一个AhpC结构域和过氧化物酶催化活性中心PVCTTE,表明EsPrx6属于1-Cys型Prx。在所检测的组织中均有EsPrx6的表达,其中以肝胰腺表达量最高,为血淋巴细胞中表达量的17.4倍。鳗弧菌刺激后,血淋巴细胞中EsPrx6的表达下降,到12 h时,实验组显著低于对照组(P0.05);随时间推移,表达水平逐渐回升,但在整个实验期间,都没有恢复到起始水平。将EsPrx6进行体外重组并在大肠杆菌E. coli BL21(DE3)中实现表达,重组EsPrx6具有预期的抗氧化活性和过氧化物酶活性,其中抗氧化活力为14.69 U/mg蛋白,高于相同条件下GSH的抗氧化力(P0.05),过氧化物酶活力为23.46 U/mg蛋白。结果表明,EsPrx6作为一种重要的抗氧化剂,在中华绒螯蟹抵御ROS可能引起的氧化损伤方面具有重要作用。 硫氧还蛋白是广泛存在于生物体内的一种具有硫醇依赖性的具有还原活性的蛋白。中华绒螯蟹Trx1(EsTrx1)基因的cDNA全长为641 bp,5` UTR为17 bp,3` UTR为306 bp,开放阅读框为318 bp,编码105个氨基酸。EsTrx1的预测分子量为12.2 kDa,理论等电点为4.8。EsTrx1不含信号肽,其氨基酸序列与其他动物的Trx1s具有高度相似性,如与地中海黄蝎的Trx1相似度达到73%;而与其他物种Trx2的同源性很低,相似度仅为14.3-22.8%,表明EsTrx1属于Trx1亚族。实时荧光定量PCR检测发现,EsTrx1在鳃、性腺、肝胰腺、肌肉、心脏和血淋巴细胞中都有表达。血淋巴细胞中EsTrx1 mRNA的表达量在菌刺激后上升,刺激后6 h,实验组表达量显著高于对照组和空白组(P0.05),然后逐渐恢复到刺激前水平。为进一步探讨其生物学功能,将EsTrx1进行体外重组并在大肠杆菌E. coli BL21(DE3)得到表达,重组EsTrx1具有预期的氧化还原调节活性,抗氧化活力为3.06 U/mg,且抗氧化活力高于GSH(P0.05)。rEsTrx1的二硫键还原活力为5.03,低于凡纳滨对虾的二硫键还原活力(10.44),接近于大肠杆菌(4.93),小牛胸腺(6.50)和小牛肝脏(5.09),而高于鲍鱼Trx2(1.83)活力。结果表明,EsTrx1在生理条件下能够作为一种重要的抗氧化剂,参与对细菌感染的免疫应答反应。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 邱顺林;;长江鲥鱼、中华绒螯蟹禁捕三年[J];淡水渔业;1987年04期
2 白国福,邢殿楼,李华;中华绒螯蟹大面积半精养高产试验[J];水产科学;1999年03期
3 许立成;中华绒螯蟹疾病的防治[J];渔业致富指南;2000年14期
4 徐海圣,徐步进;中华绒螯蟹细菌性病原的分离与鉴定[J];中国兽医学报;2002年02期
5 堵南山;中华绒螯蟹 在欧州[J];水产科技情报;2003年01期
6 何声灿;稻田示范养殖中华绒螯蟹及罗氏沼虾[J];云南农业;2003年01期
7 王宇庭,高天翔,史为良,郑有刚,赵睿;“有序样品的Fisher聚类”对中华绒螯蟹渔获物的分析[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2005年02期
8 堵南山,赖伟,薛鲁征;中华绒螯蟹染色体的研究[J];动物学研究;1986年03期
9 徐隆广;黄荣耀;;汉寿县首次采用简易设备人工繁殖中华绒螯蟹成功[J];内陆水产;1987年05期
10 邢殿楼,李华,宁甲昱,白国福,车琳萍,高清;中华绒螯蟹高密度育苗水质及调控方法探讨[J];大连水产学院学报;1998年03期
11 任维美;中华绒螯蟹对饲料蛋白质的适宜需要量[J];饲料与畜牧;1999年05期
12 马长艳,周开亚,郭豫杰,王义权,赵乃刚,汪朝晖;中华绒螯蟹卵巢差减cDNA文库的构建[J];动物学研究;2003年01期
13 宋霞,周开亚,马长艳;中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1(MIH1)基因的cDNA片段克隆和Northern印迹分析[J];中国水产科学;2003年05期
14 吕富,潘鲁青,任加云;中华绒螯蟹鳃上皮Na~+-K~+-ATPase性质的研究[J];海洋湖沼通报;2004年03期
15 李槿年,李玉英,胡守奎,李琳,方兵,余为一,张晓华;中华绒螯蟹腹水病病原分析[J];中国水产科学;2005年03期
16 施正学;朱俊杰;;中华绒螯蟹池塘高效生态养殖技术[J];水产养殖;2006年04期
17 ;全国部分城市水产品批发市场价格[J];内陆水产;2006年10期
18 ;河蟹[J];水产科学;1993年02期
19 林乃铭;网箱培育中华绒螯蟹苗试验[J];科学养鱼;1995年03期
20 李晨虹,王成辉,李思发;中华绒螯蟹性早熟的早期判别[J];水产科技情报;1998年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张金彪;杨筱珍;成永旭;范朋;吴旭干;王春;杨志刚;赵柳兰;梁攀;洪宇航;杨丽丽;;饲料中添加不同生物胺对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)生长的影响[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
2 蒋科技;张丹;皮妍;张凤英;孙曼曼;于忠利;乔振国;马凌波;;青蟹、梭子蟹、中华绒螯蟹三种经济蟹类可食部分的氨基酸、脂肪酸、重金属含量分析[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
3 邵路畅;王春;吴旭干;杨志刚;杨筱珍;成永旭;;一种配合饲料和天然饵料对中华绒螯蟹育肥品质的影响[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
4 王悦如;李二超;陈立侨;;急性盐度胁迫对中华绒螯蟹雄蟹组织中部分生理、生化指标的影响[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
5 孙晓;侯聪聪;杨万喜;;肌球蛋白Myosin Va参与中华绒螯蟹精子形成过程中顶体发生和细胞核形态建成[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
6 熊青海;陈婷;郭建英;唐建清;黄成;;不同生境下克氏原螯虾与中华绒螯蟹竞争研究[A];第三届全国生物入侵大会论文摘要集——“全球变化与生物入侵”[C];2010年
7 王群;赵云龙;马强;丁银娣;陈立侨;;微量元素锌对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)雄性生殖的影响[A];甲壳动物学分会成立20周年暨刘瑞玉院士从事海洋科教工作55周年学术研讨会论文(摘要)集[C];2002年
8 黄晓荣;庄平;章龙珍;屈亮;姚志峰;刘婷;冯广朋;刘鉴毅;;中华绒螯蟹胚胎发育及几种代谢酶活性变化的研究[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
9 于可明;侯林;;C-末端驱动蛋白KIFC1在中华绒螯蟹精子顶体形成过程中作用的分子机制[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年
10 熊青海;陈婷;郭建英;黄成;;三种生境下克氏原螯虾与中华绒螯蟹竞争研究[A];第三届全国生物入侵大会论文摘要集——“全球变化与生物入侵”[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王晶晶;中华绒螯蟹免疫致敏现象及相关分子机制的初步研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2013年
2 邱仁杰;脂肪酸营养对中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)免疫及耐低氧能力的影响[D];上海海洋大学;2011年
3 刘立鹤;中华绒螯蟹雌体脂质营养及生殖调控研究[D];华东师范大学;2005年
4 金兴坤;模式识别受体在中华绒螯蟹特异性先天免疫中的功能研究[D];华东师范大学;2014年
5 孙红英;中华绒螯蟹线粒体基因组与16S rDNA遗传标记研究[D];南京师范大学;2002年
6 马长艳;中华绒螯蟹卵巢发育相关基因的研究[D];南京师范大学;2003年
7 王立改;维生素E对中华绒螯蟹饲料脂肪利用的保护作用研究[D];华东师范大学;2014年
8 徐海圣;中华绒螯蟹常见病原的分离鉴定、致病及免疫机制研究[D];浙江大学;2004年
9 宋霞;中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因的PCR克隆及表达[D];南京师范大学;2001年
10 张成松;重要水产养殖虾蟹类的多倍体诱导及性别控制研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 宋秀梅;一氧化氮对中华绒螯蟹免疫活性的影响[D];苏州大学;2010年
2 孙丽萍;东太湖常见沉水植物作为中华绒螯蟹饲料源的可行性研究[D];苏州大学;2011年
3 狄盼盼;太湖养殖中华绒螯蟹肠道菌群多样性研究[D];上海海洋大学;2013年
4 赵莉;壬基酚对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的免疫毒性及雌激素效应研究[D];华东师范大学;2010年
5 范朋;组胺对黑褐新糠虾和中华绒螯蟹生长发育及部分免疫机能的影响[D];上海海洋大学;2011年
6 王玥;乳铁蛋白对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)免疫功能及肠道菌群的影响[D];苏州大学;2011年
7 梁倩;五氯酚钠的检测技术及在中华绒螯蟹中代谢规律的研究[D];中国海洋大学;2012年
8 刘丽花;中华绒螯蟹副性腺分泌蛋白鉴定及一种丝氨酸蛋白酶抑制剂功能研究[D];华东师范大学;2013年
9 王中清;配合饲料、鲜鱼对中华绒螯蟹幼蟹生长和相关基因表达影响;中华绒螯蟹长江口奇、偶年群体的遗传变异分析[D];上海海洋大学;2013年
10 张瑶;中华绒螯蟹肝胰腺病症的病理分析[D];上海海洋大学;2013年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 许本宏林鸣;中华绒螯蟹特色哪里来[N];中国质量报;2007年
2 特约记者 苟秀君;首批博斯腾湖中华绒螯蟹进入上海[N];巴音郭楞日报;2010年
3 姜奕轲;东海所回收人工放流中华绒螯蟹[N];中国渔业报;2011年
4 江苏省淡水水产研究所研究员 徐在宽;高效水产品种推荐——中华绒螯蟹[N];江苏农业科技报;2002年
5 淳宣;中华绒螯蟹标准化生产综合示范区通过验收[N];江苏农业科技报;2007年
6 姜奕轲;东海所放流中华绒螯蟹促进种质恢复[N];中国渔业报;2011年
7 贲腾;靖江江心洲成为省级水产种质资源保护区[N];泰州日报;2007年
8 本报记者 刘强 张利 贺福生 王文粟 贺春强;农业选择标准化 标准领衔现代化[N];农民日报;2005年
9 王健;盐城建立首家国家级河蟹标准化示范区[N];中国国门时报;2007年
10 阿米娜 阿尔法特;沙雅中华绒螯蟹热销区内外[N];新疆日报(汉);2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978