迟缓爱德华氏菌基因工程疫苗的构建及免疫效果的研究

【摘要】： 迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是一种鱼类病原菌,其感染鱼类后引起迟缓爱德华菌病(edwardsiellosis),给养殖业造成严重的经济损失。 本研究中,应用IVIAT技术,我们从病鱼体内分离的迟缓爱德华氏菌菌株TX01中筛选得到Eta21、Eta6和FliC三个抗原蛋白。其中Eta21与其他菌株中一个潜在的多肽酶相似性较高;Eta6与大肠杆菌中的Ecotin前体蛋白同源;FliC是一种鞭毛蛋白。以牙鲆(Japanese flounder)作为模式动物的研究中,发现重组Eta21蛋白能够有效的保护牙鲆抵抗迟缓爱德华氏菌的侵染;重组Eta6蛋白具有一定的保护效应;重组FliC蛋白没有明显的保护效应。 以eta6和fliC基因构建的DNA疫苗pETA6和pFliC的相对保护效率分别为50%和33%。与pETA6的保护效应相比,将eta6基因和fliC基因连在一起构建的融合DNA疫苗pCE6的保护效应显著提高。同时,将前期鉴定出的迟缓爱德华氏菌TX01的抗原基因et18连接到fliC基因的后面,构建了融合DNA疫苗pCE18。与能单纯表达Et18的DNA疫苗pEt18相比,pCE18免疫牙鲆后可以产生更好的保护效应。pEta6和pCE6免疫后,牙鲆体内产生了特异性的抗体,而且其体内一些与固有免疫和获得性免疫相关基因的表达水平也获得了提高。相对于pEta6,pCE6诱导的上述基因表达水平提高的幅度更为明显。 为提高Eta21的保护效应,我们将eta21基因与胞外琼胶酶agaV的分泌片段基因融合,构建了重组质粒pTAET21。以含有此重组质粒的大肠杆菌DH5α作为活菌疫苗,其保护效应较之重组蛋白Eta21的保护能力有明显的提高。