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孤儿受体GCNF在小鼠附睾中的研究

胡远新  
【摘要】: GCNF(Germ Cell Nuclear Factor)属于核受体超家族成员, 是一个孤儿受体。以前报道,GCNF可能参与精子分化,神经元分化以及胚胎体节和尾芽的发生和形成。编码两个不同大小的转录子(2.3和7.4kb),其序列主要在3’-UTR部分差异.其中小转录子组织及发育特异性地高表达于睾丸中,而大转录子分布较为广泛。 通过提高Northern blot的灵敏度,检测到GCNF在体内编码三个大小不同的转录子(2.3kb, 3.1kb 以及7.4kb)。其中3.1kb 和7.4kb广泛分布在各种检测的组织中, 比如,睾丸,脑,脾以及附睾。通过RT-PCR及测序分析,新转录子序列和大转录子相同。3.1kb 和7.4kb两个转录子在小鼠附睾中都受雄激素负调控。7.4kb的转录子在P19细胞中受孕激素和雌激素正调控。 为了分析GCNF在体内的三个转录子是否编码不同的蛋白,制备了抗GCNF蛋白的兔多克隆抗体。幸运地发现一种可以在短时间内(35天)成功制备多克隆抗体的简单方法。利用Western blot 分析,在编码三个转录子的睾丸中以及编码两个转录子的附睾中,都可以检测到单一的条带,分子量与预测的GCNF的阅读框架大小相似,为55kD。利用免疫组化和原位杂交分析,GCNF在附睾中的体部表达最高,两端没有或很低。GCNF在附睾中的特异表达,表明GCNF可 WP=4 能通过在体部调控一些基因的表达而参与精子在附睾中的成熟作用。


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