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人hGBP3和ALEX3基因的克隆及功能研究

栾治东  
【摘要】:论文中对两个新基因hGBP3和ALEX3的功能做一些具体的分析。 hGBP3 具有一个 1665bp 的开放阅读框(ORF), 编码一个 554aa 的蛋 白质, 从氨基酸序列分析,hGBP3具有构成GTP结合的motifs中的两个, 即GXXXXGKS,DXXG, 缺少第三个motif即N/TKXD.hGBP3能特异性结 合GTP,是一个GTP结合蛋白;hGBP3只在脑组织中表达,在所检测的其 他组织中没有表达,并且在海马和小脑中有高表达。 双杂交筛选发现hGBP3能够和NIK/HGK,一个Ser/Thr蛋白激活的C 端CHN结构域相互作用。进一步的突变实验发现,hGBP3蛋白与NIK/HGK 相互作用的结构域位于hGBP3的氨基端120残基中。GSTpull-down和免 疫共沉淀肯定了GBP3蛋白与NIK/HGK相互作用. 体外激酶实验表明hGBP3能激活是NIK/HGK,进而能激活JNK. 通过免疫共沉淀实验发现hGBP3能够与GroupIGCKs其它成员GCK, GCKR, HPK1 和 GLK 的 CHN 结构域相互作用. 揭示 HGBP3 可能是 Group I GCK 激酶一个共同调节者。 Armadillo 相关蛋白,在发育、细胞增殖、细胞极性的建立和保持的过 程中具有重要的作用。ALEX3和ALEX1、ALEX2同源性极高,且它们C 端的同源性尤其高。Northernbloting 分析显示ALEX3与ALEX1和ALEX2 具有相似的表达谱,除了外周血白细胞的其他所检测的组织中都有表达。 因为armadillorepeat往往介导了蛋白——蛋白的相互作用。双杂交筛选发 现ALEX3和原癌基因Dbl相互作用。而作为一个GTP/GDP交换因子 (GTP/GDPexchangefactor.GEF),DBL能激活Rho/cdc42 通路, 从而对 细胞骨架进行调节。我们的发现意味ALEX3是Rho/cdc42通路中的一个 成分,它的功能可能是通过DBL对细胞骨架的调节来实现。


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