收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

鹅副粘病毒SF02全基因组克隆与序列分析及锤头状核酶对病毒复制的抑制作用

邹键  
【摘要】: 禽副粘病毒(Avian Paramyxovirus virus, APMV)共有9个血清型,即APMV1~9。APMV-1只有新城疫病毒(Newcastle disease, NDV)一个成员。NDV对不同宿主致病力差别很大,鸡最为敏感,鸽子等飞禽也能感染发病,而鸭和鹅等水禽可能被感染但不表现出临床症状。1999年12月上海地区部分养鹅场爆发了一种急性烈性传染病。其病原鉴定表明该病是由一种鹅副粘病毒(Goose paramyxovirus, GPMV)所引起。该病毒命名为SF02。经分离鉴定确定其分类地位为副粘病毒科,属于APMV-1,即NDV的成员之一。但初步实验表明,与传统的NDV株相比,其致病性与NDV有显著不同。NDV只对鸡、鸽等飞禽具有致病性,而该病毒对鹅、鸡、鸽、鹌鹑、番鸭等飞禽和水禽均具有很强的致病性。 本研究内容包括: 第一部分,前已证明NDV与GPMV在致病性上有重要的区别。本研究进一步分析了二者在细胞水平的感染能力差异。采用NDV强毒株F48E9,中毒株Komarov,弱毒株La Sota和无毒性株V4/66,以及SF02分别感染鸡胚和鹅胚成纤维细胞。结果表明,尽管在整体动物水平NDV与GPMV的致病性差异显著,但在离体培养的成纤维细胞中,二者的感染性并无明显差别。这表明,NDV与GPMV在感染水禽时的致病性差异并不是因为诸如细胞膜受体等细胞水平的因素不同而造成的。 第二部分,为了进一步分析NDV与GPMV致病性差异的机理,本研究完成了对GPMV SF02的全基因组测序分析。根据已知的NDV毒株的基因组序列设计引物,用RT-PCR和Ligation-anchored PCR方法,克隆和测定了SF02的全基因组序列。序列的计算机分析结果表明,SF02全基因组长15 192 nt,与NDV相比,在NP基因和P基因之间的非翻译区多了6 nt;全基因组与NDV一样,都由3' -NP-P-M-F-HN-L- 5'六个ORF组成,但在SF02基因组的1960-1412位还存在有一 WP=4 个反义ORF,该ORF在序列已知的NDV毒株中并不存在。相似性分析表明,SF02基因组与NDV毒株的基因组的相似性达80%以上。分子进化分析表明,SF02属于VIIa基因型NDV。 根据GPMV与NDV F基因的序列差异,设计三条引物,用多重RT-PCT的方法,成功的区分了GPMV和NDV。这对有针对性地防治GPMV和NDV具有重要指导意义。 第三部分,核酶是治疗病毒性疾病的潜在有效药物之一。本研究中,针对在GPMV生活史中起膜融合和毒力决定作用的F基因,我们设计了锤头状核酶RzF598。体外切割实验表明,RzF598可以成功剪切SF02 F基因的mRNA。将RzF598转入鸡胚成纤维细胞中,以无核酶功能的突变体dRzF598和pcDNA3空质粒为对照,分析核酶对病毒增殖的抑制作用。结果表明,表达正常核酶RzF598的细胞对病毒感染具有很高的抗性,其存活率达到80%以上。未转染任何质粒的细胞和转染pcDNA3空质粒的细胞经SF02感染后存活率只有约5 %。分析可能由于反义RNA的作用,转染dRzF598的细胞对病毒也具有一定抗性。 本工作在病毒基因水平研究和探讨了NDV与GPMV致病性差异的原因,并为进一步深入研究其具体机制打下了基础。同时,初步探索了锤头状核酶对治疗该病毒引起的疾病的可行性。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 邹键,单松华,姚龙涛,龚祖埙;鹅副粘病毒SF02 F基因的序列分析及SF02的多重RT-PCR鉴别[J];生物化学与生物物理学报;2002年04期
2 邹键,龚祖埙;锤头状核酶在鸡胚成纤维细胞中的对鹅副粘病毒SF02繁殖的抑制作用(英文)[J];生物化学与生物物理学报;2003年09期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 王军亮;鹅副粘病毒的分离鉴定与油乳剂灭活疫苗的研制[D];西北农林科技大学;2003年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978