前体蛋白质加工酶抑制剂的研究

【摘要】：许多生物活性多肽在生物体内都以前体肽的形式合成,要经过前体蛋白加工酶的加工才能具有生物活性,执行生物功能。因而这些前体蛋白加工酶在生物体内起很重要的生理和病理过程的调控作用。 论文回顾了近几年前体蛋白加工酶及其抑制剂的研究进展。包括:前体蛋白加工酶的组织分布;它的翻译后加工及成熟过程;它与疾病及病原体感染的关系;以及对前体蛋白加工酶抑制剂的研究等。 前体蛋白加工酶在疾病与病原体感染中的重要作用,例如HIV的感染,炭疽菌的浸润。因而对该酶与其相应抑制剂的研究有重要意义。在以往工作的基础上,我们继续对eglin蛋白酶抑制剂的活性中心进行突变,研究其突变体分别对furin和kexin抑制活力的影响。对eglin一个双突变体(P1, P4位已变成Arg)的P’端47-49位分别进行突变,得到的结果如下:1) P2’位疏水的Leu47有利于抑制剂与furin酶的结合。不利与kexin。2)P3’位的Arg48被酸性氨基酸Asp替代后,对furin的抑制活力增强,对kexin的抑制活力则略为降低,但影响不大。3)P4’位的Tyr49被酸性氨基酸Glu取代后提高了抑制kexin的活力。表明对eglin c 在P’位上的突变可改变对furin和kexin的抑制特异性。 从天然绿豆中纯化的绿豆Bowman-Birk抑制剂具有较强的对kexin的抑制活力,其IC50达到10-8M水平。从绿豆种子的总RNA中克隆了该抑制剂的cDNA并进行了序列测定。其开放阅读框编码一个106个氨基酸的全长基因,其中包括20个残基的信号肽及12个残基的前体肽和74个残基的成熟肽。对其基因组序列的克隆和测定结果显示其内部没有内含子。进一步我们将对抑 WP=4 制剂的活性部位进行基因突变和表达,期望能获得对furin与kexin有很强抑制活性的抑制剂。