一、蓖麻蚕rDNA转录重复单位的全序列测定和转录间隔区功能分析 二、肝癌相关基因LPTS，HCRP1和Lis1的转录调控研究

【摘要】：本论文由两部分组成,第一部分是蓖麻蚕 rDNA 转录重复单位的全序列测定和转录间 隔区功能分析。本研究对蓖麻蚕完整的 rDNA 转录复制单位进行亚克隆和序列测定,确定 了前体 rRNA 的转录起始位点和一个可能的前体 RNA 加工位点。同时对 rRNA 转录起始位点 附近的序列进行了分析,初步认定蓖麻蚕 rDNA 的启动子区在高级构象上与其他生物相比 具一定保守性。由于蓖麻蚕 RNA 基因的转录间隔区相对较短但它具备真核生物 RNA 聚合酶 I 转录调控所必需的机制,因此有望将其作为 rRNA 转录调控的一个重要的模型。蓖麻蚕 rDNA 完整转录单位的序列和转录起始位点的确定为研究 rRNA 基因的转录调控和顺式元件 的正确定位打下了基础。第二部分为肝癌相关基因 LPTS,HCRP1 和 Lis1 的转录启动子克 隆鉴定和表达调控研究。癌症的发生发展是一个多步骤的过程,是各种环境因素与遗传因 素相互作用的结果。在癌细胞中同时存在抑癌基因的失活和癌基因的激活。研究肝癌相关 基因表达调控机制,对阐明肿瘤的分子病理机制具有重要意义。我们实验室通过定位候选 克隆和组织表达差异筛选的方法筛选出两个在肝癌中低表达的候选抑癌基因 LPTS 和 HCRP1,以及一个在肝癌中高表达的基因 Lis1。本工作分别克隆了三个基因的 5’上游序 列,确定了它们的转录启动子区。鉴定出 LPTS 基因的转录起始位点及启动子区的四个 DNase I 超敏位点,发现 LPTS 启动子活性在不同的肝和肝癌细胞中变化不大,但启动子 区对 DNase I 的敏感性有差别,提示染色质水平的转录调控对 LPTS 基因的表达可能影响 较大;同时分别检测了三个基因在肝癌组织中的杂合性缺失(LOH)和启动子甲基化状况, 试图说明这些基因在肝癌中表达差异的原因。经 Bisulfite-sequencing、MSP 和 DHPLC 联合检测表明,三个基因在肝癌中都不受启动子甲基化因素的影响。LPTS 和 HCRP1 基因 在肝癌中分别有 34.5%和 50%发生 LOH,提示 LPTS 和 HCRP1 基因的 LOH 是造成基因表达下 调的重要因素。另外利用 RNA 干扰技术特异性降低内源性 Lis1 基因的表达后发现 Lis1 的低表达可以显著抑制培养的肝癌细胞的生长。对这些基因的表达调控和功能方面的研究 将为进一步阐明肝癌发生的分子机制和发展肝癌的分子诊断及治疗提供帮助。