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利用转座子系统定向突变拟南芥基因以及拟南芥FA121和FA254两基因功能的研究

张森  
【摘要】:拟南芥基因组测序已经完成,所有的序列都可以在互联网上查到,但是到目前为止知道功能的拟南芥基因大约只占总基因数的10%左右。在未来的基因功能研究中,反向遗传学方法可能会发挥非常重要的作用。我们试图利用植物转座子建立基因定向突变系统,用于反向遗传学研究。玉米转座子Ac (Activator) 和Ds (Dissociation) 能在许多植物包括拟南芥中跳动。Ac和Ds家族的转座子跳动后经常以较高的频率在原位点附近再插入,因此,原位点周围的基因通常易遭破坏。我们使用了Nina Fedoroff 构建的转座子系统,该系统可以通过抗性标记,检测Ds发生转座的植物株系。我们通过转化得到了365个独立的转Ds-T-DNA株系。通过TAIL-PCR方法我们定位了54个单位点插入并且Ds可以跳动的Ds-T-DNA。同时,我们测定了两个Ds-T-DNA株系中Ds跳跃后再插入的频率,以了解这一定向突变系统的可操作性。我们的结果表明在这两个Ds-T-DNA株系中,Ds跳跃后再插入的分布情况是基本相同的,在距离Ds-T-DNA原插入位点400Kb处Ds跳跃后再插入的频率约为0.6%。这些结果表明我们这套定向突变系统可以有效地用于反向遗传学研究。为了便于拟南芥研究工作者利用这套系统定向突变基因,我们建立了可供查寻的已定位的Ds-T-DNA的数据库。


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