收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人胚胎干细胞和兔胚胎干细胞的建系与鉴定

方贞付  
【摘要】:本实验室利用临床多余的囊胚进行人胚胎干细胞(human embryonic stem cells, hES)建系研究,首先用链蛋白酶消化以去除囊胚的透明带,然后直接机械分离出内细胞团,接种到饲养细胞层(feeders)上,在hES 细胞培养液中进行培养。一共成功建立了7 个hES 细胞系,其中6 个细胞系来自体外受精(in vitro fertilization, IVF)囊胚,分别命名为SH4、SH28、SH35、SH38、SH39 和SH42;1 个细胞系来自卵胞浆内单精注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)产生的囊胚,命名为ICSI-ES。 根据hES 细胞系的公认的鉴定标准,我们对这些新建立的细胞系各项特征进行了检测。这些hES 细胞在体外能长期稳定增殖,表达碱性磷酸酶活性,表达hES 细胞特异的标志物Oct-4、TDGF、Sox2、LeftyA、Thy-1、FGF4、Rex1、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81。除了SH28 和ICSI-ES(ICSI-ES 体外分化能力待测)外,其他5 株在体外能形成包含三个胚层来源分化细胞的类胚体(embryoid body, EB)。除了SH4、SH28 和ICSI-ES(ICSI-ES 体内分化能力待测)外,其他5 株在免疫缺陷鼠体内能形成包含三胚层来源组织的畸胎瘤。其中SH35经过单细胞克隆化,产生一个hES 细胞亚系(SH35a),仍保持hES 细胞的各项特征,具有与SH35 细胞相同的生长形状,体外分化能形成类胚体,体内分化能在免疫缺陷鼠体内能形成包含三胚层来源组织的畸胎瘤。这些细胞系的群体倍增时间在30-39 小时之间,到目前为止,这些细胞系在体外已经分别培养420、390、345、335、335、335、180 天,培养代数达75、70、60、60、60、60、30。经过长期的培养仍保持正常的核型(SH4, SH28, SH35, SH38 和ICSI-ES 为46, XX;SH39 和SH42 为46, XY)。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王彦,丛笑倩,曹谊林;人胚胎干细胞培养建系及其应用[J];细胞生物学杂志;2005年04期
2 马岚,郑萍,季维智;猕猴胚胎干细胞的分离培养和鉴定[J];第三军医大学学报;2004年15期
3 孙海翔;招霞;胡娅莉;张宁媛;王玢;陈华;王俊霞;徐志鹏;陈林君;;人胚胎干细胞系NJGLLhES1的建立[J];中华男科学杂志;2008年12期
4 汪河海,刘红林,钟卉,范必勤,丁家桐;小鼠胚胎干细胞(ES细胞)培养体系的建立[J];江苏农业研究;1998年02期
5 赖良学,郑瑞珍,辛俭,朱少侠,秦鹏春,孙方臻;家兔囊胚在饲养层上的生长行为[J];动物学报;1998年03期
6 赵丹,张玉兰,张新平;小鼠囊胚内细胞团的生长行为[J];基础医学与临床;2004年02期
7 戢开丽;仇恒滨;严为巧;庄新杰;段亚苹;张明;卢盛晟;卢克焕;;昆明小鼠胚胎干细胞建系的初步研究[J];广西农业生物科学;2008年04期
8 张天荫;动物胚胎发育讲座(一)──动物胚胎早期发育概况[J];生物学通报;1994年07期
9 刘红林,范必勤;猪胚胎常规冷冻及其去脂冷冻研究[J];生物技术通报;1996年02期
10 林戈,卢光琇;小鼠体外培养囊胚辅助孵化的初步研究[J];生殖与避孕;2001年04期
11 冯云,孙贻娟,金颖,孙博文;人卵母细胞孤雌激活获得囊胚国内首报[J];上海第二医科大学学报;2005年10期
12 林戈,龚斐,陆长富,周虹,肖小满,卢光琇;低回收卵患者囊胚培养和移植结局的初步探讨[J];中华妇产科杂志;2001年09期
13 常万存,窦忠英,仲跻峰,宋杰,刘文浩,张蓉;胚胎干细胞研究进展与应用价值[J];山东农业科学;1999年05期
14 李红霞;胚胎干细胞分离与克隆相关技术的研究近况[J];华西医学;2002年02期
15 孙海翔,顾惠心,佘宏;应用序列培养系统培养鼠囊胚的效果观察[J];中国实验动物学杂志;2000年04期
16 张永苗,张宁媛;囊胚培养与囊胚移植的研究进展[J];中华男科学;2001年04期
17 尚克刚,李子玉,吴鹤龄;建立小鼠胚胎多能干细胞系(ES细胞系)的几个主要影响因素[J];遗传学报;1992年06期
18 冼美薇,吴白燕,胡新立,尚克刚,吴鹤龄;通过显微注射法构建ES细胞(MESPU 13)嵌合小鼠[J];遗传;1996年01期
19 张玉兰,陈瑛,杨志鸿;人晚期囊胚体外培养中的动态观察[J];西安医科大学学报;2001年04期
20 白照岱,刘凯,邴鲁军;胰岛素对小鼠早期胚胎体外发育的影响[J];生殖医学杂志;2004年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张丽瑞;李旭;陈葳;;人胚胎干细胞建系的方法学研究进展[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
2 鲁振宇;张云山;王毅娜;罗海宁;杜湧瑞;;应用人胚胎肺组织成纤维细胞饲养层培养人胚胎干细胞的研究[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年
3 韦东;;人胚胎干细胞相关发明可专利性研究[A];发展知识产权服务业,支撑创新型国家建设-2012年中华全国专利代理人协会年会第三届知识产权论坛论文选编(第一部分)[C];2011年
4 吴应积;FenhuaLuo;Aileen Lu;John W.McDanold;;间隙连接蛋白在人胚胎干细胞中的表达[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年
5 李艺;张祖娟;崔恒;;人胚胎干细胞作为肿瘤疫苗的初步研究[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年
6 衣少莉;李建华;崔胜;;类固醇激素对小鼠1-细胞胚胎体外发育和囊胚移植后的影响[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
7 孙莹璞;孔慧娟;耿嘉暄;;小鼠胚胎干细胞系的建立及影响因素探讨[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年
8 罗向东;;人胚胎干细胞的分离培养及应用前景[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
9 赵惠萍;王绮如;程腊梅;谭孟群;;诱导人胚胎干细胞向造血细胞分析[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
10 安立龙;窦忠英;杨奇;冯秀亮;;分化抑制物对牛和小鼠胚胎体外发育的影响(英文)[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 方贞付;人胚胎干细胞和兔胚胎干细胞的建系与鉴定[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2005年
2 王芳;多囊卵巢综合征源性人胚胎干细胞系的建立及分化为脂肪细胞的相关研究[D];郑州大学;2010年
3 欧阳琦;解决人胚胎干细胞免疫排斥的方法研究[D];中南大学;2010年
4 后晓南;小鼠囊胚体外侵袭肿瘤细胞现象的初步解析[D];重庆医科大学;2002年
5 宦晴;人胚胎干细胞生物学性状及向内皮分化过程中ID-1基因作用的研究[D];山东大学;2010年
6 王苟思义;新基因HESRG在人胚胎干细胞中的功能、表达调控及其在人类颅内肿瘤的表达[D];中南大学;2012年
7 吴蓉蓉;人胚胎干细胞建系,鉴定及分化为多能性间充质样前体细胞[D];浙江大学;2009年
8 武建中;用于分离昆明小鼠治疗性胚胎干细胞的囊胚生成途径相关问题研究[D];西南大学;2009年
9 徐晨明;人胚胎干细胞建系及线粒体和细胞骨架的分布模式与胚胎干细胞分化关系的研究[D];浙江大学;2008年
10 李大强;恶性肿瘤细胞与囊胚滋养层细胞侵袭性生物学行为的比较性研究[D];重庆医科大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 姜祖韵;小鼠胚胎干细胞建系及人胚胎干细胞培养体系的建立初探[D];浙江大学;2005年
2 鲁振宇;影响人囊胚形成因素的研究与人胚胎干细胞建系的初步探讨[D];天津医科大学;2006年
3 董立平;两种信息可视化工具在学科知识领域应用的比较研究——人胚胎干细胞文献分析[D];中国医科大学;2010年
4 韦东;人胚胎干细胞相关发明可专利性研究[D];华东政法大学;2011年
5 刘李栋;人胚胎干细胞相关发明的可专利性[D];上海交通大学;2012年
6 王凤武;表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞的分离与鉴定[D];内蒙古大学;2007年
7 魏晋;人胚胎干细胞向心室和心房肌细胞分化和富集的研究[D];西南大学;2012年
8 罗建;双酚A对人胚胎干细胞拟胚体发育的影响:初步的基因组学研究[D];南京医科大学;2012年
9 王毅娜;人胚胎干细胞建系、初步鉴定及应用不同方法冷冻人胚胎干细胞的研究[D];天津医科大学;2007年
10 徐兰;人胚胎干细胞全机械法建系及定向分化为神经细胞的研究[D];上海交通大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;人胚胎干细胞研究伦理指导原则[N];健康报;2004年
2 记者 赵秋丽;山东科学家成功克隆人类囊胚[N];光明日报;2009年
3 谭浩 林乐良;我科学家成功克隆人类囊胚,有助攻克疑难杂症[N];新华每日电讯;2009年
4 记者 马跃峰;中国成功克隆人类囊胚[N];人民日报海外版;2009年
5 欣华;我国培育成功“自然囊胚试管婴儿”[N];中国医药报;2004年
6 记者左朝胜;人胚胎干细胞建系报道多有出入[N];科技日报;2002年
7 刘笑春;囊胚培养显微受精婴儿诞生[N];健康报;2001年
8 张荔子;禁止克隆人和买卖人类胚胎[N];健康报;2004年
9 记者 姚琳 实习生 江艳;国内首例囊胚玻璃化冷冻 临床妊娠在我区获得成功[N];广西日报;2005年
10 李忠东;看环境育儿的动物们[N];大众科技报;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978