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两种神经元死亡模型机制的探讨—钾离子丢失介导的凋亡和谷氨酸诱导的死亡

曾睿  
【摘要】:电压依赖的钾(Kv)通道是一类参与神经元的兴奋性活动的通道。它的一段保守的T1 区对于通道的组装和亚基四聚体的形成有重要的作用。近期有证据表明血清剥夺或staurosporine诱导的皮层神经元凋亡与细胞内K+丢失是有关联的,用钾通道的阻断剂TEA 或提高胞外K+减弱外向K+电流能减少凋亡。蛋白激酶A(PKA)是一种对细胞存活有重要作用的激酶。本实验室在Kv 通道的T1 区找到了一段可能被PKA 磷酸化的保守序列,并用相应的非磷酸化和磷酸化(如在Kv1.4 上是丝氨酸229)多肽免疫兔子得到了抗体(1505IV 和1505pV)。我的工作是发现了这两个抗体特异性识别的蛋白的大小分别是100kD 和120kD。我还在HEK293 细胞中过表达了Kv1.4,并用PKA 的激动剂forskolin 刺激,结果用1505pV 抗体发现Kv1.4可以被磷酸化。再结合1505IV 与商业化Kv1.4 抗体识别的蛋白大小相一致的结果,我们认为在神经元中1505IV 和1505pV 分别识别的是非磷酸化和磷酸化的Kv1.4。另外我还构建了Kv1.4S229A 和Kv1.2S84A 突变质粒,为下一步的实验奠定了基础。


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