收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

以烟草花叶病毒为载体在植物中表达外源多肽的研究

江陆斌  
【摘要】:烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus, TMV)属烟草花叶病毒属(Tobamovirus),其基因组是带有帽子结构的正义单链RNA,全长6395bp。TMV的一个亚基因组RNA编码了病毒的外壳蛋白(coat protein, CP),在TMV系统感染烟草后,其表达量可达被感染烟草总蛋白的7%。通常,将较短的外源多肽序列插入TMV CP中Gly155的下游,重组病毒仍然能够在宿主植株内被融合CP包装并高效地复制。本文实验工作主要集中在TMV基因组序列、CP中外源小肽的长度和序列特征以及病毒粒子的形成和构象之间的关系等方面的研究,并以此提高利用TMV载体表达外源多肽的能力。 在对携带FMDV抗原20肽的重组病毒TMVF20进行亚硝酸钠诱变分析的实验基础上,我们以缺失了TMV CP羧端4个氨基酸(G-P-A-T)的重组TMV为载体,成功地获得了两个感染强度较高的重组病毒TMVF20TAG和TMVF25TAG(分别表达外源20和25肽)。同时,我们以FMDV抗原11肽为外源插入肽,把外源小肽在TMV CP中的融合位点分别移至W152和T153的下游,并对CP的羧端序列做了不同程度的缺失,这些重组病毒的对烟草的感染活性、病毒后代的稳定性及融合CP的表达情况(2-4毫克/克新鲜烟草)都接近野生型TMV;并且,用这些重组病毒粒子制备的疫苗在豚鼠和猪的动物实验中亦表现出了对FMDV的良好的免疫效率。这些结果说明缺失TMV CP羧端的部分序列(T-S-G-P-A-T)不仅不会影响重组病毒粒子的包装、感染效率及其在疫苗生产领域的应用,而且有助于重组病毒载体携带表达更长的外源肽。 在对携带FMDV抗原28肽的重组病毒TMVF28TGA的研究中,我们观察到外源肽中由于半胱氨酸(Cys)的存在致使重组病毒基因组发生了一系列突变,并且产生了一类具有不规则构象的重组病毒粒子(TMVF18TAA)。上述突变现象随着TMVF28TGA外源肽中的Cys被替换为其他氨基酸(如Tyr)而消失。这些结果暗示,外源肽中的某些序列特征(如含有Cys),可能会严重影响融合CP的完整表达乃至重组病毒


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 马铮,李巧丽,宋任涛,许政暟;外壳蛋白羧端序列缺失对烟草花叶病毒侵染性的影响[J];病毒学报;2005年04期
2 马铮;李巧丽;;缺失外壳蛋白羧端155-158序列对TMV侵染性的影响[J];湖北农业科学;2008年08期
3 李向阳;陈卓;杨松;宋宝安;;分子靶标烟草花叶病毒外壳蛋白的结构生物学研究进展[J];农药学学报;2010年04期
4 王钧,胡运乾,陈菀苑;烟草花叶病毒外壳蛋白嵌合基团的重组[J];云南植物研究;1987年04期
5 王钧,胡运乾;烟草花叶病毒外壳蛋白嵌合基因的重组(简报)[J];云南植物研究;1987年02期
6 夏荻,巫爱珍;烟草花叶病毒外壳蛋白N-末端二肽乙酰化的研究[J];病毒学报;1990年02期
7 杨兴洪,吴晓东,张连忠,冷强;花叶病毒与植物相互作用的分子生物学[J];植物生理学通讯;1997年02期
8 李英,胡运乾,陈文岗,王钧;烟草花叶病毒外壳蛋白的基因导入和转化烟株的再生[J];云南植物研究;1989年03期
9 田颖川,秦晓峰,王桂玲,杨毛周,方荣祥,许丙寅,莽克强;表达烟草花叶病毒外壳蛋白的转基因烟草及其对TMV的抗性[J];中国科学B辑;1990年08期
10 王钧,俞德超,柳念祖;从带烟草花叶病毒外壳蛋白亚基因组启动子的负链RNA产生正链RNA[J];病毒学报;1996年03期
11 马晓东;陈珊珊;李重九;;丙酰紫草素对烟草花叶病毒外壳蛋白的钝化作用研究初探[J];分析测试学报;2008年S1期
12 俞德超,柳念祖,王钧;对烟草花叶病毒外壳蛋白亚基因组RNA生成机制的进一步研究[J];病毒学报;1996年03期
13 成久俊,巫爱珍,孙玉昆;直接从乙酰化N-末端测定烟草花叶病毒外壳蛋白氨基酸序列[J];科学通报;1986年08期
14 周雪平,刘勇,薛朝阳,李德葆;烟草花叶病毒蚕豆株系外壳蛋白基因及3'端非编码区的克隆与序列分析[J];病毒学报;1997年03期
15 巫爱珍,戴仁鸣,沈学仁,孙玉昆;烟草花叶病毒的核糖核酸5′-端帽子结构在病毒颗粒中的位置与病毒的感染力[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;1984年05期
16 莽克强;孙玉昆;;病毒生化讨论会概况[J];生命的化学;1984年01期
17 刘勇,周雪平,李德葆,刘志敏;TMV蚕豆株系CP基因及3′端非编码区序列分析与表达[J];湖南农业大学学报;1997年01期
18 陈占洲;李怀方;;烟草原生质体在植物病毒研究中的应用[J];安徽农业科学;2006年06期
19 商文静;吴云锋;商鸿生;赵小明;杜昱光;;壳寡糖对烟草花叶病毒的体外钝化作用[J];病毒学报;2008年01期
20 吴丽萍,吴祖建,林奇英,谢联辉;一种食用菌提取物y3对烟草花叶病毒的钝化作用及其机制[J];中国病毒学;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 卢航;王文霞;尹恒;赵小明;杜昱光;;壳寡糖对烟草花叶病毒的体外钝化[A];植物保护科技创新与发展——中国植物保护学会2008年学术年会论文集[C];2008年
2 武改霞;黄娜;杨帅;孙现超;青玲;;温州蜜柑萎缩病毒小外壳蛋白的原核表达与纯化[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
3 颜瑾;朱亚峰;丸山稚子;大村敏博;;植物呼肠孤病毒外壳蛋白与昆虫传毒机制的研究进展[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
4 覃秉益;张秀华;田波;;烟草花叶病毒弱毒疫苗N_(14)的研制及其在番茄上的应用[A];全国生物防治学术讨论会论文集[C];1991年
5 辛玉成;祝学璋;赵素香;刘元美;王存礼;;抑病毒菌素的分离纯化与应用[A];新世纪(首届)全国绿色环保农药技术论坛暨产品展示会论文集[C];2002年
6 Ida Bagus Andika;孙丽英;孙炳剑;陈剑平;;中国小麦花叶病毒外壳蛋白的翻译策略与小麦品种抗病性相关[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
7 成巨龙;;藜科植物中对烟草花叶病毒(TMV)抑制物特性的研究[A];中国烟草学会第三届理事扩大会议文件汇编暨中国科协第三届青年学术年会烟草卫星会议论文集[C];1998年
8 司民真;武荣国;康颐璞;刘仁明;;用便携式拉曼光谱仪获取烟草花叶病毒的表面增强拉曼光谱[A];第十五届全国光散射学术会议论文摘要集[C];2009年
9 黄治强;刘玉秀;王开亮;范志金;汪清民;李广仁;黄润秋;姚宇澄;于学舜;;牛心朴子草中生物碱的抑制植物病毒活性研究[A];中国化学会第二十五届学术年会论文摘要集(下册)[C];2006年
10 张建新;吴云锋;;西瓜花叶病毒外壳蛋白和辅助蛋白与介体蚜虫体内相关蛋白的相互作用[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 江陆斌;以烟草花叶病毒为载体在植物中表达外源多肽的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2003年
2 李红霞;几种抗病毒药剂对烟草花叶病毒的抑制作用及相关机理研究[D];河北农业大学;2010年
3 李巧丽;烟草花叶病毒载体及其在植物中表达外源多肽的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2004年
4 邵碧英;烟草花叶病毒弱毒疫苗的研制及其分子生物学[D];福建农林大学;2001年
5 赵明敏;siRNA干扰TMV侵染及其分子机理的研究[D];西北农林科技大学;2005年
6 商文静;壳寡糖对烟草花叶病毒的诱导抗病作用和体外抑制作用[D];西北农林科技大学;2006年
7 刘小红;玉米矮花叶病抗性的分子机理研究[D];四川农业大学;2005年
8 郑银英;苹果茎沟病毒和褪绿叶斑病毒分子变异研究[D];华中农业大学;2005年
9 王亚南;辣椒轻斑驳病毒的检测及其与烟草花叶病毒症状差异相关因子研究[D];中国农业科学院;2008年
10 蒙姣荣;番茄RNA病毒寄主因子基因ToTOM3的克隆与功能鉴定[D];华南农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈梅;植物激活蛋白对烟草花叶病毒(TMV)的生物活性及作用机理初探[D];河北农业大学;2005年
2 郑丽;烟草花叶病毒外壳蛋白诱导烟草抗病毒作用[D];福建农林大学;2009年
3 殷培军;植物源抗病毒剂VFB抗烟草花叶病毒(TMV)活性研究[D];西北农林科技大学;2005年
4 於春;植物病毒衣壳蛋白进入叶绿体的离体跨膜运输研究[D];南京农业大学;2008年
5 吴刚;烟草花叶病毒灭活因子的初步研究[D];福建农林大学;2000年
6 杨松;烟草种传烟草花叶病毒(TMV)的初步研究[D];浙江大学;2005年
7 杨学习;烟草花叶病毒地黄分离物移动蛋白基因的克隆、序列分析及对番茄的遗传转化[D];河南农业大学;2003年
8 陈良华;藻红蛋白荧光标记技术及在烟草花叶病毒检测上的应用[D];福建农林大学;2005年
9 王伟伟;枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶抗烟草花叶病毒活性及其酶学性质的初步研究[D];西北农林科技大学;2008年
10 吴俊杰;烟草花叶病毒和番茄花叶病毒在烟草上致病性差异的分子机理研究[D];浙江大学;2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 晓荻;西尼罗河病毒外壳蛋白[N];医药经济报;2002年
2 田茹 马文生 付文飙 董敬民;九万里风鹏正举[N];中国国门时报;2003年
3 曾耀英;HIV疫苗 研究思路[N];中国中医药报;2006年
4 邹先彪;消毒谨防过敏和灼伤[N];保健时报;2003年
5 叶常生;何为乙肝“两对半”[N];医药养生保健报;2004年
6 刘飞;南非尝试“种植”癌症疫苗[N];中国医药报;2004年
7 李彬;南非尝试“种植”癌症疫苗[N];科技日报;2004年
8 基因潮;美国默克公司进行预防HIV的临床试验[N];中国高新技术产业导报;2002年
9 罗继春;以色列番茄——R-144[N];山西科技报;2001年
10 通讯员  罗倩 记者  彭德倩;基因疫苗抵挡口蹄疫[N];解放日报;2006年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978