收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

构树DREB转录因子及木质素合成代谢相关基因的克隆及功能分析

孙静文  
【摘要】: 构树(Broussonetia papyrifera L.)为桑科构树属落叶乔木,广泛分布于我国大部分地区。它是我国重要的经济林木,其树皮纤维品质优良,自古就是造纸的优良原料;而且它的环境适应性强,是迅速绿化荒山、荒滩和盐碱地的理想树种。对构树这些特性的深入研究和开发利用具有非常重要的生产现实意义。为了探讨构树应答环境胁迫的分子机制和木质素合成代谢的规律,本论文开展了抗逆转录因子和木质素代谢相关基因的分离、克隆以及功能分析等工作,为通过转基因技术在分子水平改良构树提供理论依据和技术保障。目前,取得如下的研究进展: 1.采用RACE的克隆方法,从构树中克隆到一个DREB类转录因子,将其命名为BpDREB。该基因序列全长为1384bp,编码一个由330个氨基酸组成的蛋白。序列分析表明:BpDREB基因具有DREB转录因子所特有的核定位信号、DNA结合域以及转录激活域;它与其他已知的DREB基因除了在保守的AP2/EREBP结构域处具有很高的同源性外,在其它的区域同源性不高。利用Southern杂交证实该基因是以单拷贝的形式存在于构树基因组DNA中。Northern杂交分析表明BpDREB基因的表达受高盐、干旱环境逆境的诱导,而不受低温胁迫所诱导,并且其表达不依赖于ABA的调控。 2.构建两个在酵母中表达的重组载体pAD-BpDREB和pLexA BD-BpDREB,通过两个独立的酵母单杂交试验验证构树DREB蛋白的DNA结合域和转录激活域。将这两个融合表达载体分别转入酵母菌株JM4271和酵母菌株EGY48,并分别在SD/-His + 10 mM 3-AT和SD/ -Leu-Ura-His的平板上筛选转化子,同时进行显色鉴定以及β-半乳糖苷酶活性的定量测定,从而检测2个报告基因的表达情况。试验结果表明:构树DREB蛋白具有DREB转录因子的两大功能结构域,即DNA结合域与转录激活域,能够特异地识别DRE元件,并能激活下游目标基因的表达。 3.构建在植物中正向过量表达的双源表达载体p3301-121-BpDREB,将其转入农杆菌EHA105中。通过沾花法直接转化拟南芥,获得T1代转BpDREB基因植株。用PCR和Gus染色的方法对转基因拟南芥进行了分子检测。并对转基因


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王怡杰;韩烈保;;植物DREB转录因子与植物激素的相互作用[J];生物技术通报;2011年04期
2 刘翠芳;邹杰;陈信波;;DREB转录因子与植物非生物胁迫抗性研究进展[J];生物技术通报;2010年10期
3 梁崇;冯宇梅;彭日荷;熊爱生;薛永;李贤;姚泉洪;黄英金;;水稻WRKY16基因分析及其转化拟南芥研究[J];上海农业学报;2009年03期
4 陈金焕;夏新莉;尹伟伦;;植物DREB转录因子及其转基因研究进展[J];分子植物育种;2007年S1期
5 高峰;熊爱生;彭日荷;刘金戈;蔡斌;陈建民;姚泉洪;;抗逆相关DREB转录因子的研究进展及应用[J];上海农业学报;2008年01期
6 王晓飞;程宪国;王迎波;吴庆钰;白由路;梁永超;;Floral-dip法大豆GmDREB转录因子转拟南芥研究[J];生物技术通报;2008年05期
7 付月;李学龙;薛永常;;木质素合成酶基因F5H的克隆及其鉴定[J];安徽农业科学;2006年08期
8 刘琦;武晓东;郭金良;武小霞;;DREB转录因子及其在大豆中的应用[J];大豆科技;2008年04期
9 刘卫群;王永亮;赵同金;周海梦;郭蔼光;;烟草DREB-like转录因子的克隆与鉴定[J];农业生物技术学报;2006年03期
10 陈铮;邹维华;张霞;唐咏;范云六;赵军;;转录因子ABP9基因在不同启动子驱动下对转基因拟南芥生长发育的影响[J];中国农业科技导报;2008年03期
11 才华;朱延明;柏锡;纪巍;李勇;王冬冬;孙晓丽;;野生大豆GsbZIP33基因的分离及胁迫耐性分析[J];分子植物育种;2011年04期
12 阳文龙;刘敬梅;刘强;公衍道;赵南明;;高羊茅DREB类转录因子基因的分离及鉴定分析[J];核农学报;2006年03期
13 刘卫群;王永亮;郭红祥;赵同金;周海梦;郭蔼光;;烟草DREBP转录因子结合DRE元件的关键氨基酸[J];中国生物化学与分子生物学报;2006年02期
14 才华;朱延明;李勇;柏锡;纪巍;王冬冬;孙晓丽;;野生大豆转录因子GsNAC20基因的分离及胁迫耐性分析[J];作物学报;2011年08期
15 刘国华,舒洪岚,张金池;南京幕府山构树群落种群动态的研究[J];安全与环境学报;2003年06期
16 韦作林;构树是石山区生态扶贫的好树种[J];广西林业;1997年06期
17 孙学海;蔗扁蛾在构树上的为害特点及防治方法[J];中国值保导刊;2003年11期
18 吴际友,童方平,龙应忠;杂交构树嫩枝短穗扦插育苗技术[J];林业科技开发;2003年06期
19 赵天榜;构树1-2龄材纤维形态初步研究[J];河南林业科技;1994年03期
20 周宇;王玉玺;;百名专家共推“一棵树”——国家林业局杂交构树研讨会侧记[J];绿色中国;2007年13期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙京燕;张寒霜;赵俊丽;李伟明;王立安;;DREB转录因子及其在转基因方面的应用[A];中国棉花学会2006年年会暨第七次代表大会论文汇编[C];2006年
2 陈旭君;郭泽建;;增加表达AP2/EREBP类转录因子OPBP1基因提高烟草的抗逆能力[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
3 高峰;夏瑞强;熊爱生;肖宁;洪义欢;姚泉洪;陈建民;;水稻AP2/EREBP类转录因子基因的功能研究[A];江苏省遗传学会植物分子育种学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年
4 易可可;吴忠长;周洁;吴运荣;吴平;;植物耐低磷转录因子研究[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
5 石其龙;李晖;余沛涛;杨仲南;;一个控制拟南芥花粉粒形成基因的初步功能分析[A];2007中国植物生理学会全国学术会议论文摘要汇编[C];2007年
6 邸鹏;陈万生;张磊;;构建“转录因子-启动子”耦联载体开展植物生物碱次生代谢工程[A];中国植物学会七十五周年年会论文摘要汇编(1933-2008)[C];2008年
7 吴艳;徐岚;周迎会;吴士良;;人类β1,3半乳糖基转移酶7(UDP-Gal:betaGlcNAc beta 1,3-galactosyltransferase polypeptide 7)催化功能的研究以及该基因表达与转录因子ets-1的相关性的探索[A];2008年全国糖生物学学术会议论文摘要[C];2008年
8 吴艳;徐岚;吴士良;;人类β3GalT7/GNT8 (UDP-Gal:betaGlcNAc beta 1,3-galactosyltransferase polypeptide 7)催化功能的研究以及该基因表达与转录因子ets-1的相关性的探索[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
9 李肖霞;宋一萌;朱振久;付成来;李承红;朱毅;;转录因子KLFs在血管内皮祖细胞增殖分化中的作用[A];第七届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2009年
10 李蕾;谢丙炎;戴小枫;杨宇红;;辣椒抗病相关WRKY转录因子基因的分离及特征分析[A];中国植物病理学会2006年学术年会论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙静文;构树DREB转录因子及木质素合成代谢相关基因的克隆及功能分析[D];中国科学院研究生院(植物研究所);2006年
2 温洪涛;玉米bHLH类转录因子ABP7基因功能分析[D];中国农业科学院;2011年
3 王新亮;果树根系硝态氮信号响应关键基因的克隆与功能分析[D];山东农业大学;2012年
4 陈良;油菜抗逆相关基因的鉴定和功能研究[D];华中师范大学;2011年
5 赵华燕;利用反义RNA技术进行木质素生物合成调控的研究[D];中国科学院研究生院(植物研究所);2004年
6 刘翔;与海岛棉纤维发育相关AG-Subfamily和MYB类转录因子的功能研究[D];上海交通大学;2009年
7 徐兆师;小麦抗逆相关DREB/ERF转录因子基因的克隆与鉴定[D];中国农业科学院;2005年
8 牛一丁;苜蓿DREB类转录因子基因的研究[D];内蒙古大学;2008年
9 刘雪梅;白桦木质素生物合成酶基因分离及遗传转化的研究[D];东北林业大学;2005年
10 于彦丽;青杄中两个与花粉萌发和花粉管生长相关基因的分离和功能的研究[D];山东农业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王迎波;番茄LeDREB1转录因子基因在转基因拟南芥中的功能分析[D];中国农业科学院;2010年
2 孙海桃;小麦DREB转录因子与冷激蛋白基因功能鉴定[D];内蒙古农业大学;2011年
3 王帅;高粱中一个DREB类转录因子基因的克隆[D];河北农业大学;2011年
4 刘晓雪;碱蓬DREB同源基因的克隆与功能分析[D];南京农业大学;2010年
5 林楠;通过木质素调控改良杨树制浆性能的研究[D];首都师范大学;2008年
6 冯锋;烟草(Nicotiana tabacum)中DREB转录因子的克隆和功能分析[D];河南农业大学;2008年
7 李桢;杨树木质素生物合成调控的研究[D];首都师范大学;2009年
8 肖雄;紫大麦草(Hordeum violaceum)中DREB类转录因子基因的克隆、原核表达及序列分析[D];河北农业大学;2012年
9 黄聪;花生中DREB、bZIP类转录因子耐逆性研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
10 宗俊梅;冰凌花转录因子AaDREB1基因的表达分析及功能鉴定[D];吉林农业大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 贵州三农楮桃产业开发有限公司;发展构树产业 促进贵州生态经济发展[N];中国贸易报;2005年
2 晓田;野生构树有望出深山 [N];中国花卉报;2003年
3 梁凌林;极具开发价值的乡土树种——构树[N];中国绿色时报;2005年
4 傅颖记者 修伟;新树种有望大面积融入我市林业格局[N];大连日报;2008年
5 王小龙;科学家提高了多功能干细胞安全性[N];科技日报;2009年
6 本报记者 潘晓娟;杂交构树 开启生态产业绿色之门[N];中国经济导报;2007年
7 湖北省松滋市林业局高级工程师 李继均;优良乡土树种——构树[N];湖南科技报;2006年
8 刘树铎范思立;构树产业大有发展前景[N];中国经济时报;2007年
9 记者 王左军;构树杂交研究取得重大进展[N];中国绿色时报;2007年
10 白毅;UXT蛋白可增强转录因子NF—κB活性[N];中国医药报;2007年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978