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生淀粉糖化酶产生菌的分离筛选及其产酶条件

肖长清  
【摘要】:从大曲和土壤中分离到了三株降解生淀粉能力较强的生淀粉糖化酶产生菌:黑曲霉(Aspergillus niger) A-6、拟青霉菌(Paecilomyces sp.) P-3、毛霉M-16 (Mucor sp.),三株菌固体培养时酶活都较高,分别为2461U/g、2237U/g、1891U/g,RDA值分别为21.47%、15.25%、27.07%; 液体培养时,只有菌A-6表现出较强的酶活,为353U/mL,RDA值为20.30%。对菌A-6 (Aspergillus niger)、菌P-3 (Paecilomyces sp.)这两株菌粗酶液的酶学特性进行了初步探讨,它们水解生玉米粉24h后的水解率分别为88.57%、86.88%; 最适作用pH是4.0,最适作用温度是70℃; 60℃时两株菌粗酶液的热稳定性比较好,60℃处理5小时都还有60%左右的酶活,但是70℃时两株菌粗酶液的热稳定性比较差,70℃处理2小时失活率超过85%; 同时还发现菌A-6的粗酶液水解生玉米粉时,α-淀粉酶有一定的促进作用。 对菌P-3的生长条件和固体发酵条件进行了初步探讨,发现其最适生长温度为30℃,最适生长起始pH值为5; 固体发酵时,其产酶的最适起始pH值是7,最适温度是25℃,最适加水量是80%,在这些条件下培养6天可达到最大酶活2473U/g。 以菌A-6为实验材料,进一步考察了氮源、碳源及pH对其生淀粉糖化酶形成的影响。实验结果表明pH是影响生淀粉糖化酶形成的重要因素,低pH会阻遏生淀粉糖化酶的形成; 无机氮源NaNO3较有机氮源蛋白胨更有利于生淀粉糖化酶的形成; 玉米粉和麦芽糖较其它碳源更有利于生淀粉糖化酶的形成。通过正交实验优化菌A-6的液体发酵培养基,酶活可以提高到422.5U/mL,其培养基组成(%)是:玉米粉4,黄豆粉3,麦麸1,


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