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银鲫BAC文库的构建及其特征分析

耿凡锁  
【摘要】: 制备了银鲫的基因组文库(BAC文库)。已获得了79104个克隆。对随机取样的160个重组克隆的分析表明, 95%的插入片段分布在80-195kb之间,73%的插入片段超过100 kb,平均插入大小为104kb。以流式细胞仪对银鲫血细胞DNA含量的测定,推算出银鲫单倍体基因组大小为1600Mb.由此计算出本文库覆盖了5倍银鲫基因组。对文库的稳定性也进行了评估。随机挑取6个BAC克隆,连续接种培养5天,每天代表20代。对每一天的BAC克隆进行Not I酶切分析。脉冲电泳图谱表明,没有重排现象,银鲫BAC克隆在培养的过程中是很稳定的。随后,以特异的基因引物,用PCR方法对文库进行筛选,找到了在鱼类胚胎发育过程中发挥重要作用的基因的克隆。这些克隆包括C-lectin, 138, vasa, DAZL, sox3, interferon等等。 银鲫BAC基因组文库将为比较基因组学和多倍体鱼类的生殖机制提供一个重要的工具,并且也为基础生物学研究和鱼类育种工程提供一个有用的资源。


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