收藏本站
收藏 | 论文排版

噬菌体展示介导的免疫扩增病原检测方法研究

郭永超  
【摘要】: 当前感染性疾病的严峻现状和生物恐怖的潜在威胁使病原微生物的检测面临严重的挑战。本研究发展了一种新的病原检测方法,称为噬菌体展示介导的免疫扩增病原检测方法。该方法巧妙地利用了表面展示有单链抗体的重组噬菌体本身具有抗原结合分子和内部含有DNA的特点,通过表面展示的抗体识别目标抗原,利用内部的DNA作为核酸扩增的模板,把重组噬菌体作为载体直接介导完成免疫识别和信号检测过程。根据信号扩增方法的不同,可以分为噬菌体展示介导的免疫PCR和噬菌体展示介导的恒温扩增两种方法。噬菌体展示介导的免疫PCR是一种新型的免疫PCR方法,它利用重组噬菌体作为免疫PCR的载体。以汉坦病毒核蛋白为例,本研究论证了噬菌体展示介导的免疫PCR方法是一种高灵敏的病原检测方法,灵敏度比传统的酶联免疫吸附(ELISA)方法提高1,000-10,000倍,达到10 pg/ml。同时利用Real-time PCR技术结合标准曲线使该方法能够对抗原定量检测。检测结果表明重复性较好,在夹心检测的模式下2,000ng/ml到2 ng/ml的检测范围内R~2值达到0.96。本研究随后用恒温扩增方法代替PCR扩增噬菌体DNA发展噬菌体展示介导的恒温扩增方法,希望能摆脱对热循环仪的依赖。首先尝试噬菌体展示介导滚环扩增方法,该方法检测HIV P24抗原的灵敏度为100 pg/ml,但是所需的时间较长,而且检测的特异性不强。随后采用链置换扩增(strand displacement amplification,SDA)以取代滚环扩增作为信号检测的方法发展了噬菌体展示介导免疫链置换扩增方法。链置换扩增的效率很高,反应时间只需一个小时,检测HIV P24抗原和HBV HBsAg的灵敏度比传统的ELISA方法灵敏度提高1,000-10,000倍,同时结合荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)探针做实时监测,使该方法的特异性大大增强。本研究发展的噬菌体展示介导的免疫扩增检测方法兼具免疫学检测方法的高特异性和核酸扩增方法的高灵敏度,而且成本低廉,有希望推广使用成为一种病原检测的常规方法。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 姜文国;高中静;颜丙新;刘伟;赵福河;白传记;段延华;;2009~2010年济宁市流行性感冒监测分析[J];中国热带医学;2011年06期
2 何光志;田维毅;高英;王平;王文佳;奚锦;俞琦;王乾宇;黄高;;抗蛔虫人源单链抗体库的构建及鉴定[J];湖南师范大学自然科学学报;2011年03期
3 张斯恩;尹家丽;杨海清;;人类免疫缺陷病毒检测方法及流程[J];检验医学与临床;2011年13期
4 郑钟洁;程绍辉;周宁;潘玲;王欣;郑敏娜;;妇科门诊就诊者与收教所暗娼生殖道人乳头瘤病毒及其他性病感染情况调查[J];中国慢性病预防与控制;2011年03期
5 王素娟;刘金明;邢荣鹤;石耀军;金亚美;李浩;林矫矫;;日本血吸虫基因重组抗原rSj06868对小鼠的免疫保护效果[J];中国动物传染病学报;2011年02期
6 任保彦;陈玉兰;宫鹏涛;李巍;李建华;苏利波;李赫;杨举;刁玉梅;张西臣;;微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21的原核表达及鉴定[J];畜牧兽医学报;2011年08期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨栋强;于海涛;张野;李彧;王伟;蒋伟;苏雯静;白雪帆;;应用噬菌体展示从七肽展示库筛选β3整合素受体拮抗剂[A];第四届中国医师协会感染科医师大会暨传染病诊治高峰论坛、浙江省医学会肝病、感染病学学术年会论文汇编[C];2011年
2 杨华;刘忠华;杨焕森;王洁;沙巍;胡忠义;;结核特异性血清标志物的筛选研究[A];中华医学会结核病学分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年
3 邓展云;刘海斌;王伯辉;朱秋珍;李鸣;王维赞;谭裕模;;广西甘蔗宿根矮化病的发生及病原检测[A];中国作物学会甘蔗专业委员会第十一次学术讨论会论文集[C];2004年
4 安同庆;周艳君;仇华吉;王云峰;童光志;;利用噬菌体展示技术鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原表位[A];中国生物化学与分子生物学会农业生物化学与分子生物学分会第六次学术交流会论文集[C];2004年
5 梁贤芳;米夏莲;;罗氏沼虾病原检测及模拟试验结果分析[A];西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集[C];2000年
6 李茹;陈巧林;赖蓓;栗占国;;类风湿关节炎滑膜组织T7噬菌体展示cDNA文库的构建[A];首届全国中青年风湿病学学术大会论文汇编[C];2004年
7 刘新平;张晓光;韩炯;李福洋;王吉村;药立波;;噬菌体展示的小肽序列差异对TNF-α诱导的细胞毒作用的影响[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
8 田纯见;曹永长;毕英佐;;口蹄疫病毒3C基因的克隆和噬菌体展示[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年
9 黄巍;李凌波;韩玲;杨渝珍;;用重组TACE胞外功能域从噬菌体展示随机15肽库筛选TACE的抑制肽[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年
10 汪世华;张新艳;王天文;王宗华;;细菌HrpA蛋白的单链抗体的制备[A];2005全国第二届核酸疫苗研讨会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郭永超;噬菌体展示介导的免疫扩增病原检测方法研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2007年
2 万小妹;几种药物与药物载体生物功能的研究[D];中国科学技术大学;2010年
3 田媛;前列腺癌细胞结合单链抗体的筛选、表达纯 化及其功能初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
4 杨松川;从噬菌体展示抗体库中筛选抗TSP50单链抗体及可溶性蛋白表达[D];吉林大学;2006年
5 郭微;磁性粒子表面修饰及其在功能性小分子作用组学研究中的应用[D];上海交通大学;2012年
6 孟露露;基于表位预测的抗B型肉毒毒素基因工程抗体的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年
7 霍锐;人源含硒单链抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶[D];吉林大学;2008年
8 王子彤;使用SEREX方法筛选和鉴定肺鳞癌相关抗原[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2009年
9 俞海青;噬菌体展示短肽亲和配基的筛选及其亲和色谱的研究[D];天津大学;2004年
10 汪思应;基于c-Met受体抗癌先导分子的筛选及其对HGF/c-Met信号途径的阻断效应[D];安徽医科大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王欣之;噬菌体展示日本血吸虫SSj14单抗的模拟表位及免疫保护性研究[D];扬州大学;2005年
2 马晓丽;噬菌体在血液中的失活及其机理研究[D];中国科学技术大学;2009年
3 刘美云;从噬菌体抗体库中淘选B淋巴细胞刺激因子(BlyS)的中和抗体[D];暨南大学;2005年
4 袁翔;鼠源性人肿瘤单链抗体库的构建及乳腺癌相关抗体的筛选[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
5 费小战;SARS冠状病毒刺突蛋白S144-643的原核表达及其重要生物特性研究[D];华中农业大学;2005年
6 何永刚;应用噬菌体展示技术筛选Pres结合肽寻找乙型肝炎病毒特异性结合蛋白[D];兰州大学;2006年
7 赵磊;抗口蹄疫病毒单克隆抗体的制备和抗原模拟表位的筛选[D];安徽农业大学;2008年
8 陈美娟;噬菌体展示青霉素G酰化酶大肠杆菌—枯草杆菌通用表达载体的构建[D];扬州大学;2002年
9 孙美艳;展示白色念珠菌热休克蛋白90特异表位的杂合噬菌体抗系统性白色念珠菌感染的免疫保护作用研究[D];东北师范大学;2007年
10 彭伍平;利用噬菌体展示技术鉴定猪瘟病毒E2蛋白抗原表位[D];中国农业科学院;2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 北京协和医院检验科副主任 徐英春 整理 吴刚;加强病原检测 杜绝抗生素滥用[N];健康报;2010年
2 陈滟;广东局全力提升实验室建设管理水平[N];中国国门时报;2008年
3 通讯员 吴志军柴国祥;铸造人兽共患病防疫盾牌[N];科技日报;2008年
4 林岳夫;我国研制出多联鱼病防治疫苗[N];中国海洋报;2004年
5 本报记者 苏伟钿 杜丽玲;扎根基层 无怨无悔[N];汕头日报;2005年
6 杨志俊;创业创新创特色 以质施检谋发展[N];中国国门时报;2007年
7 郑灵巧;北京手足口病发病情况平稳[N];健康报;2008年
8 林岳夫;福建制成多联鱼病防治疫苗[N];农资导报;2004年
9 记者 李鹏;恢复供澳活鸡及禽肉制品[N];国际商报;2004年
10 记者昝爱宗;浙江海洋与渔业中心实验即将落成[N];中国海洋报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978