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XPD相关蛋白在线粒体中的质谱分析

陈苗  
【摘要】:XPD (Xeroderma pigmentosum complementary group D)是一种DNA解旋酶,XPD突变与人类三种遗传性疾病相关,分别是人类着色干皮病(XP)、Cockayne综合征(CS)以及毛发硫性营养不良综合征(TTD)。已有的研究表明,XPD在核苷酸切除修复(NER),肿瘤发生,染色体分离等过程中起重要的作用。本实验室的前期结果表明XPD定位于线粒体,且XPD参与线粒体中的氧化性损伤修复,这些研究提示XPD可能参与线粒体的相关功能。为了探讨XPD在线粒体中的功能和作用通路,本研究首先提取氧化性损伤处理后细胞的线粒体,免疫共沉淀出线粒体中与XPD相互作用的蛋白,通过液相色谱-质谱分析鉴定互作蛋白。通过后期数据分析筛选出56种可能与XPD有相互作用的蛋白,其中11种为线粒体蛋白。通过进一步分析,发现它们主要参与离子转运,ATP合成,DNA生物合成,复制以及代谢反应的调节。这些结果提示XPD可能与这些线粒体蛋白相互作用,共同参与这些生物过程。本研究挑选出2种互作蛋白作为研究对象,其中,HSP70和HSP90是两种分子伴侣,可以协助蛋白质从细胞质进入线粒体。免疫共沉淀实验证明XPD可以与HSP70和HSP90相互作用。初步研究结果提示XPD通过分子伴侣HSP70/HSP90协助转运进入线粒体。


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