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绿盲蝽(Apolygus lucorum)性信息素的提取鉴定及应用研究

张涛  
【摘要】:绿盲蝽Apolygus lucorum是我国黄河流域和长江流域地区棉花产区的重要害虫,除危害棉花外,绿盲蝽在枣、葡萄、樱桃、桃、苹果、茶树、杨树苗和马铃薯等其它作物上危害也十分严重,一般年份能够损失可达到20-30%,严重年份超过50%。同时,绿盲蝽抗药性非常严重,危害严重地区每年需要喷洒化学农药10余次。大量使用农药,在杀死天敌的同时,给环境及人类健康造成了潜在危害。 鉴于大面积爆发的绿盲蝽缺乏有效的防治方法,我们提出利用性信息素来作为监测和防治绿盲蝽的手段。本研究利用气相色谱(GC)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)、触角电位仪(EAG)、气相色谱-触角电位联用(GC-EAD)和田间试验等方法与技术,首次对我国绿盲蝽的种内化学通讯进行了系统的研究,旨在探明我国绿盲蝽性信息素通讯及其动态变化规律,并为利用性信息素防治绿盲蝽提供理论支持和试验依据。主要结果如下: 1.绿盲蝽性信息素的提取和鉴定 通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)分析,雌性绿盲蝽二氯甲烷提取物中的主要成分有三种:4-氧代-反-2-己烯醛、丁酸己酯和丁酸-反-2-己烯酯,其含量分别为21.75±2.04μg/头、1.42±0.56μg/头和23.74±1.89μg/头。而雄性绿盲蝽二氯甲烷提取物中主要成分与雌虫相同,但其比例有所不同,具体含量分别为13.68±3.32μg/头、27.73±6.54μg/头和3.84±1.67μg/头。丁酸己酯和丁酸-反-2-己烯在雌雄体内的比例完全相反,丁酸己酯为雄性绿盲蝽分泌的反性信息素。 2.性信息素的释放规律 绿盲蝽性信息素的释放量从暗周期开始到暗周期后2小时内没有明显变化;但从暗周期后2小时开始,提取物中4-氧代-反-2-己烯醛和反-2-丁酸己烯酯的含量迅速减少,至暗周期后约5小时其含量减少至最低点,说明绿盲蝽性信息素的释放高峰期可能在暗周期开始后2h-4h。光周期时雌性绿盲蝽体内性信息素含量逐渐增加,光照10h后即可达到4-氧代-反-2-己烯醛和反-2-丁酸己烯酯含量达到较高水平。说明绿盲蝽性信息素产生后并非立即释放出来,而是先在体内贮存,待暗周期求偶时释放。雌性绿盲蝽提取物中丁酸己酯的含量非常低,平均含量低于0.5μg,同时与暗周期、光周期没有明显的关系,没有明显规律性。 3.性信息素的合成及活性测定 利用化学合成受到对绿盲蝽提取三种主要组分:4-氧代-反-2-己烯醛、丁酸己酯和丁酸-反-2-己烯酯进行了人工合成,并通过核磁共振(HNMR)和质谱(MS)进行结构确认。通过触角电位(EAG)和气相色谱-触角电位联用(GC-EAD)对人工合成的性信息素进行了初步活性测定,证明三种人工合成化合物均能引起雄性绿盲蝽的触角反应,其中丁酸己酯的EAG反应最强,达到6.36±0.54mV,同时三种组分的二元、三元混合物的EAG活性显著高于单一组分。但是在Y形管嗅觉仪测定行为试验时,无论是单一组分还是二元、三元组分均不能明显吸引雄性绿盲蝽。 4.田间诱捕试验及配方优化 以实验室人工合成的性信息素化合物配制成自制诱芯进行田间诱捕试验,结果发现,单一组分诱捕到雄性绿盲蝽数量非常少,同时非常不稳定。而4-氧代-反-2-己烯醛和丁酸-反-2-己烯酯配比在一定范围时,能够诱捕到大量雄性绿盲蝽。通过田间试验对性诱剂配方进行优化,得出4-氧代-反-2-己烯醛和丁酸-反-2-己烯酯的比例在900:600时诱捕效果最好。丁酸己酯对诱捕效果没有贡献,并且会抑制对雄虫的吸引。 5.反性信息素的研究 丁酸己酯能够明显抑制性诱剂对雄性绿盲蝽的吸引效果,并且有非常高的活性。在由4-氧代-反-2-己烯醛和丁酸-反-2-己烯酯配组成的诱芯中,加入不同浓度的丁酸己酯,可以看出随着丁酸己酯量的增加,诱捕数量明显减少。当丁酸己酯达到性诱剂有效成分10%以上,性诱剂几乎失去活性。雌雄绿盲蝽交配后,雄性绿盲蝽将之注入雌虫体内或者诱导雌雄绿盲蝽产生丁酸己酯,其作用在于干扰其他雄性绿盲蝽对该雌虫的化学通讯定位,阻止其他绿盲蝽与该雌虫二次交配。 6.其他盲蝽性信息素的初步研究 采用同样的提取和鉴定方法,对中黑盲蝽Adelphocoris suturalis、三点盲蝽Adelphocoris fasciaticollis和苜蓿盲蝽Adelphocoris lineolatus的性信息素进行了初步鉴定,发现其主要组分同样为4-氧代-反-2-己烯醛、丁酸己酯和丁酸-反-2-己烯酯,但与绿盲蝽相比三种盲蝽中4-氧代-反-2-己烯醛含量很少。其中雌性中黑盲蝽和三点盲蝽中以丁酸己酯为主,雌性苜蓿盲蝽提取物中以丁酸-反-2-己烯酯为主。本研究首次鉴定和分析了绿盲蝽的性信息素的主要成分及其精确含量和比例,首次发现绿盲蝽中反性信息素的存在,并对其干扰绿盲蝽交配进行了验证试验。通过EAG反应、田间诱捕试验验证了性信息素的活性成分,获得了最佳诱芯的配方,可以直接应用于绿盲蝽的田间大量诱捕。本研究丰富了昆虫性信息素研究的内容,为绿盲蝽的高效、无毒、无污染、无公害防治提供了新方法、新途径。


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