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不同萝卜抗源抗黑腐病相关基因差异表达比较研究

王少伟  
【摘要】:黑腐病是严重影响十字花科蔬菜生产的世界性细菌病害。为了筛选萝卜黑腐病抗源和挖掘抗病优异基因,本文采用三种不同的鉴定方法对萝卜种质资源进行了鉴定,并采用DDRT-PCR和cDNA-AFLP对不同萝卜抗源抗黑腐病相关基因表达进行了研究,主要研究结果如下: 1.对40份初选萝卜种质分别接种Xcc8004和XccBJ两个菌株,进行黑腐病苗期抗性鉴定;对其中的8份代表性萝卜种质采用肉质根切片接种Xcc8004进行抗性鉴定;对其中的27份萝卜种质接种8个含有效应物基因的农杆菌,进行过敏反应鉴定。结果表明:不同萝卜种质苗期对黑腐病的抗性存在显著差异,筛选出对Xcc8004表现高抗的材料3份,对XccBJ表现高抗的材料1份。萝卜苗期不同材料对Xcc8004和XccBJ的抗性表现极显著相关,萝卜苗期和肉质根对Xcc8004的抗病性极显著相关。稳定可靠抗病资源的获得为萝卜抗病育种和抗病机理深入研究提供了基础材料。筛选出17份对不同效应物表现过敏反应的萝卜种质。不同抗源对不同效应物的过敏反应程度有所不同。 2.利用cDNA-AFLP技术,研究了4份萝卜抗病材料KB09-1、KB09-12、KB09-17、KB09-16和1份感病材料KB09-29接种和未接种黑腐菌Xcc8004的基因差异表达。256对引物组合在参试材料中扩增出790个差异表达条带。克隆得到的74个差异片段按其功能分为8类。在多份萝卜种质中都涉及信号转导、蛋白质代谢、光合作用、抗病防御及转运等序列的差异表达。不同萝卜抗源表达的抗性相关基因不完全相同。 3.对高抗黑腐病萝卜种质KB09-12分别接种效应物xopXccN和xopXccX2,利用cDNA-AFLP方法获得153个差异表达条带。25个测序条带分析表明,接种xopXccN和xopXccX2公共差异表达条带主要涉及信号转导和抗病防御,接种xopXccN的特异差异表达条带主要涉及光合作用,接种xopXccX2的特异表达差异条带主要涉及蛋白质合成、加工。比较KB09-12接种效应物与接种Xcc8004的基因差异表达发现:少部分差异条带同时出现在过敏反应和抗病反应中。


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