紫花苜蓿3个开花相关基因的克隆与初步鉴定

【摘要】：紫花苜蓿是一种重要的豆科牧草,研究其成花机理具有重要意义。本实验运用同源克隆和RACE技术获得紫花苜蓿LEAFY(LFY)基因、Flowering Locus T(FT)基因和NMH7基因的cDNA序列,并进行初步鉴定。主要研究结果如下: 紫花苜蓿LFY基因基因组全长2138bp,包含两个内含子;开放阅读框长为1176bp,编码392个氨基酸;编码的蛋白定位于细胞核;半定量RT-PCR结果表明,该基因在根、茎、叶、花蕾、花和荚果中都有表达,花蕾中的表达量最高,花和荚果中次之,根、茎和叶中的表达量较低;该基因的表达受光照和赤霉素诱导,随着处理时间的增加,表达量呈上升趋势,达到一定水平后保持不变;通过构建该基因的植物表达载体,运用农杆菌介导的方法将该基因导入烟草中,PCR和RT-PCR检测结果表明,成功获得转基因烟草,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。 紫花苜蓿FT基因基因组全长1705bp,包含三个内含子;开放阅读框528bp,编码176个氨基酸;编码的蛋白定位于细胞核中;表达分析结果表明,该基因在叶和花蕾中的表达量最高,花中次之,在根、茎和荚果中的表达水平都很低;该基因的表达受光照和水杨酸的诱导,随着处理时间的增加,表达量呈现上升趋势,达到一定水平后保持不变;运用TAIL-PCR技术,获得该基因转录起始位点上游1235bp的序列,顺势作用元件分析表明这一序列包含大量光诱导元件,同时还包含水杨酸应答元件、热应答元件和MYB结合元件。 紫花苜蓿NMH7基因的开放阅读框长为687bp,编码229个氨基酸;编码的蛋白定位于细胞核中;半定量RT-PCR结果表明,该基因在根、花蕾、花、荚果中都有表达,在花中表达量最高,在茎和叶中没有表达;该基因的表达受脱落酸和茉莉酸甲酯抑制,赤霉素对该基因的表达没有影响。