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我国山羊(接触)传染性胸膜肺炎病原学、流行病学研究及灭活疫苗的研制

储岳峰  
【摘要】:山羊(接触)传染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleuropneumonia, CCPP)是由山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp. capripneumoniae, Mccp)引起的山羊呼吸道传染病,是OIE法定报告动物传染病之一。我国于2007年分离出1株Mccp,并在同年证明上世纪50年代分离的3株“山羊传染性胸膜肺炎”病原也应归类于Mccp,证实了CCPP在我国存在。随着CCPP的发现,弄清其在我国现阶段的流行状况及其起源、研制安全有效的疫苗等成为亟需解决的问题。本研究的内容和结果如下: 1.对我国已报道与CCPP相关的3种支原体Mccp、绵羊肺炎支原体(Movi)和丝状支原体山羊亚种(Mmc)的培养和形态特征进行了观察,发现Mccp、Movi生长缓慢,液体培养物不浑浊或轻微浑浊,Mccp菌落直径200~500μm,有中心脐,Movi直径70~350μm,无中心脐;Mmc生长速度快,液体培养物浑浊,菌落直径300~1800μm,有中心脐;根据培养表现和菌落形态可对这3种支原体进行初判。免疫印迹试验发现Mccp与Mmc之间存在双向交叉反应,Mmc血清与Movi之间、Movi血清与Marg之间存在单向交叉反应,表明以多抗血清或全菌抗原为基础建立CCPP诊断方法不可靠。 2.通过PCR检测和病原分离鉴定,从13个省市(区)送检的122份疑似CCPP的病料中检出Mccp、Movi、Mmc、山羊支原体山羊亚种(Mcc)和精氨酸支原体(Marg)共5种支原体。23.8%的Mccp检出率和6株Mccp的分离,证实CCPP在我国现阶段流行;但Movi的高检出率(58.2%)和分离率(52.4%)是否具有重要的致病意义尚需进一步研究;而Mmc的低检出率(1.64%)和2株Mmc的分离提示Mmc对我国养羊业的影响需进一步证实;国内首次分离到1株Mcc表明羊支原体病病原日趋复杂;而Mccp与溶血性曼氏杆菌(Mh)、多杀性巴氏杆菌(Pm)、隐秘化脓杆菌(Ap)、山羊痘病毒(GTPV)、羊口疮病毒(ORFV)等多病原混合感染给羊病的防制带来了新的挑战。 3.用Mccp特异性间接血凝试验,对11省市(区)的2281份山羊和绵羊血清进行了血清学调查,结果10省市(区)呈现不同程度CCPP阳性,平均阳性率16.40%,从血清学角度证实CCPP在我国现阶段流行。而绵羊血清中Mccp抗体阳性(14.77%,n=1510)在CCPP流行和危害中的意义需进一步确定。 4.对我国6株Mccp的H2基因序列进行分析,发现我国流行的Mccp属于2种不同的基因型:A和Ad,且当前流行菌株与上世纪50年代流行菌株具有遗传相似性,表明CCPP在我国长期存在。 5.国内外首次完成了1株Mccp(M1601株)的全基因组测序,其基因组全长1018102 bp,G+C含量为23.97%,含961个编码序列。 6.国内首次完成了CCPP灭活疫苗(M1601株)的实验室研制。将M1601株菌体悬液用甲醛溶液灭活后与佐剂603M乳化制成疫苗,每毫升疫苗中含0.125 mg M1601菌体蛋白。无论羊只大小,颈部皮下注射3 ml,可使免疫羊获得4/5或以上免疫保护,免疫持续期至少6个月,且对不同生理状况的山羊均安全。疫苗在2~8℃可保存15个月。 7.我国“山羊传染性胸膜肺炎”与英文专业名词“CCPP”概念不一致,建议将由Mccp引起的山羊疾病改称“山羊接触传染性胸膜肺炎”,与CCPP统一;而将其它支原体引起的山羊和/或绵羊肺炎称之为“羊支原体性肺炎(Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats, MPSG)”。


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