收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

猪圆环病毒2型的分子流行病学分析及病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达

李玲  
【摘要】:猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是无囊膜单股环状负链DNA病毒,基因组大小约为1.76kb,根据PCV的基因组成以及其抗原性不同可将其分为两种基因型,即猪圆环病毒1型(Porcine circovirus type1,PCV1)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)。PCV1最初是从污染的猪肾传代细胞(porcine kidney-15cells,PK-15)上分离得到的一种广泛存在且无致病性的动物病毒。PCV2是由Ellis等首次从断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning MultisystemicWasting Sydrome,PMWS)病猪体内分离到,已证明是PMWS的主要病原,自1991年加拿大首次爆发PMWS以来,其他国家和地区也相继报道PMWS的传播与发生。PCV2可能还是其他疾病,如猪皮炎与肾病综合征、猪呼吸道疾病综合征、增生性坏死性肺炎、先天性振颤等的相关病原。 1、为了解PCV2分子流行病学变化趋势,本实验室于2008-2011年间从福建、江西、广东、安徽、浙江、河南、河北、广西壮族自治区、内蒙古自治区、上海、江苏和山西共12个省(市、区)的健康猪群和发病猪群共采集452份样品,对其进行PCV2检测,结果显示,452份样品中,有354份样品检测为PCV2阳性,感染率高达78.3%。通过扩增、克隆和测序共获得31株PCV2ORF2基因编码序列,比对分析结果表明,31株PCV2均为PCV2b基因亚型,其中有21株归类于PCV1A/1B基因亚群,而9株为PCV1C亚群。对31株PCV2ORF2编码氨基酸序列比对分析表明PCV2基因亚型及亚群具有其特异的氨基酸变异位点,这对于临床上区别PCV2亚型及亚群具有一定的指导意义。从基因水平上来说,自2008年以来我国以PCV1A/1B亚群为主要流行株,但值得我们关注的是,PCV1C亚群毒株从无到有并有逐渐增多的趋势,并将来可能在PCV2的流行毒株中占据主要地位。 2、本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码PCV1A/1B的ORF2基因经昆虫细胞密码子偏爱性优化后人工合成,然后将其插入供体质粒pFastBac~(TM)ⅠPPH启动子控制下的多克隆位点,将构建质粒转化至DH10BAC感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得了重组穿梭杆粒rBacmid-cap和rBacmid-opt-cap,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒,通过间接免疫荧光证明重组蛋白在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得表达。通过荧光定量PCR方法测定上清中病毒拷贝数来选择获得最高滴度的扩增条件。通过蛋白印迹法测定不同表达时间和感染复数(Mutiplicity of infection, M.O.I)值条件下细胞中目的蛋白表达量,确定目的蛋白的最佳表达条件。结果表明,目的蛋白在昆虫细胞中实现了表达,并可以装配成病毒样颗粒(Virus-likeparticles, VLPs),直径约为17纳米。与野生型基因相比,经过密码子优化的PCV1A/1B ORF2基因在昆虫细胞中的表达水平得到提高。以M.O.I值为0.05感染昆虫细胞后在96h条件下可以收获最高滴度的重组杆状病毒,以M.O.I值为5.0表达48h可以获得最佳的目的蛋白表达量。病毒样颗粒的表达与表达条件的优化,能够为PCV2基因工程疫苗的开发打下扎实的基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 姜焱,张常印,张敬友,陈国强;猪圆环病毒血清I型和II型的PCR鉴别[J];动物医学进展;2003年05期
2 李元新;刘来利;王必成;;猪圆环病毒研究概况[J];甘肃畜牧兽医;2007年01期
3 窦小荣;;猪圆环病毒2型ORF2基因克隆、原核表达及免疫原性测定[J];黑龙江畜牧兽医;2011年15期
4 韩凌霞,童光志;猪圆环病毒的研究进展[J];畜牧兽医科技信息;2002年02期
5 郭立军;;浅议猪圆环病毒[J];畜牧兽医科技信息;2008年06期
6 周盛华;崔尚金;;猪圆环病毒生物学特性及防治对策[J];畜禽业;2006年15期
7 李宋钰;;猪圆环病毒研究进展[J];福建畜牧兽医;2007年01期
8 尹卫卫;孙继国;宋洁;王铮;;猪圆环病毒研究进展[J];畜禽业;2006年06期
9 罗玉均;张桂红;陈建红;杨林;廖明;任涛;罗开健;;猪圆环病毒2型分离毒株全基因组克隆与序列分析[J];中国兽医杂志;2007年05期
10 张秀珊;刘刚;李淑梅;孙继国;;保定地区猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆与序列分析[J];中国兽医杂志;2009年05期
11 张晓勇,郑其升,魏雪涛,谈国蕾,任雪枫,曹瑞兵,陈德胜,陈溥言;猪圆环病毒II型ORF2基因在酵母中的高效分泌表达[J];中国病毒学;2005年02期
12 唐丽;赵玉军;许立博;;猪圆环病毒2型的研究进展[J];中国畜牧兽医;2008年04期
13 刘洪云;陈晓清;陆国林;;猪圆环病毒的特点和防控对策[J];国外畜牧学(猪与禽);2007年03期
14 苗丽娟;;猪圆环病毒的研究进展[J];养殖技术顾问;2008年05期
15 李艳琴;王振海;赵东岗;朱玉涛;;猪圆环病毒研究进展[J];安徽农业科学;2008年17期
16 黄伟坚,连慧香,蒋小红,罗廷荣,陆芹章,韦英益,蓝可耀,阮强,莫荣燕,温传新,张美,余克伦;广西断奶仔猪猪圆环病毒II型的检测(摘要)[J];广西畜牧兽医;2003年02期
17 孔繁德;徐淑菲;陈琼;黄印尧;陆承平;;猪圆环病毒2型厦门株-1的ORF2基因序列分析[J];福建农林大学学报(自然科学版);2006年02期
18 王新;郭万柱;徐志文;王印;颜其贵;王小玉;周婷;罗燕;;应用PCR-RFLP方法对四川猪圆环病毒的检测与分型研究[J];黑龙江畜牧兽医;2006年06期
19 孙艳明;赵德明;;猪圆环病毒分子生物学研究进展[J];中国畜牧兽医;2006年07期
20 王海花;李艳玲;汪德刚;张桂云;;猪圆环病毒的研究进展[J];家畜生态学报;2006年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 梁鹏帅;蔡汝健;刘燕玲;孙瑞芹;张龙现;宋长绪;;华南地区猪圆环病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒检测分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 池贤凤;王文秀;沈志强;;猪圆环病毒检测技术的研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 王贵华;陈义锋;张工;刘明明;赵亚荣;;猪圆环病毒2型毒株分离鉴定[A];新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会论文集[C];2010年
4 周双海;汤世坤;邵小雪;;PCV2体外感染对猪内皮细胞中细胞因子mRNA转录的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
5 郭抗抗;张彦明;吴亚文;汤智慧;王晶钰;朱向博;张红;刘华科;;屠宰生猪PCV-2感染的检测与基因型分析[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年
6 王鑫;叶贺佳;李敏;仇微红;孙招金;梁昭平;;猪圆环病毒研究进展[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会(第三届中国兽药大会学术论坛)论文集[C];2010年
7 翟少伦;陈胜男;张建武;韦祖樟;龙进学;袁世山;魏文康;陈琴苓;宣华;吴大成;;猪圆环病毒感染人类的可能途经剖析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
8 程荣华;刘云志;孙健;呼延含蓉;赵欣;邵洪泽;张丽媛;杨金生;;浅谈猪圆环病毒研究现况[A];低碳经济与科学发展——吉林省第六届科学技术学术年会论文集[C];2010年
9 杨芳;陈立功;李艳琴;宋勤叶;赵丹萍;李潭清;;猪圆环病毒2型SD/2008株对仔猪的致病[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
10 刘建波;郭龙军;危艳武;黄立平;吴洪丽;刘长明;;猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染的检测及TTV遗传变异分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 帅江冰;猪圆环病毒衣壳蛋白核定位信号对其复制的影响及突变体病毒的免疫原性研究[D];浙江大学;2008年
2 李俊;猪圆环病毒2型遗传演化及含CpG基序的核酸疫苗研制[D];山东师范大学;2012年
3 杨宗照;猪圆环病毒2型的检测及皂苷类化合物对核酸疫苗的免疫增强作用[D];浙江大学;2008年
4 华利忠;猪圆环病毒2型诱导仔猪淋巴细胞凋亡途径的研究[D];南京农业大学;2011年
5 郭龙军;猪圆环病毒2型不同基因型毒株的遗传变异、抗原表位及其致病性研究[D];中国农业科学院;2012年
6 娄忠子;猪圆环病毒2型核衣壳蛋白抗原表位的筛选与鉴定[D];中国农业科学院;2010年
7 尹双辉;猪圆环病毒2型衣壳蛋白病毒样颗粒的制备及其免疫原性的研究[D];中国农业科学院;2011年
8 朱玲;猪圆环病毒Ⅰ型、Ⅱ型全基因克隆及其基因交换重组的研究[D];四川农业大学;2005年
9 曹胜波;猪圆环病毒感染性分子克隆构建及siRNA对rep基因表达抑制研究[D];华中农业大学;2005年
10 张兴晓;鸭圆环病毒的分子流行病学调查及诊断方法的建立[D];山东农业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王淑娟;河南部分地区猪圆环病毒2型的分离鉴定及生物学特性研究[D];河南农业大学;2011年
2 李超;安徽地区猪圆环病毒2型的流行病学调查及地方株的特性研究[D];安徽农业大学;2010年
3 邵小雪;嵌合猪圆环病毒的构建及其对仔猪的免疫原性[D];新疆农业大学;2010年
4 梁鹏帅;广东省规模化猪场猪圆环病毒感染情况及分子特征研究[D];河南农业大学;2012年
5 李璇;猪圆环病毒2型(PCV-2)感染小鼠传播途径的研究[D];湖南农业大学;2010年
6 赵丹萍;猪圆环病毒2型感染影响猪瘟弱毒疫苗免疫效果的机制[D];河北农业大学;2012年
7 李玲;猪圆环病毒2型的分子流行病学分析及病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达[D];中国农业科学院;2012年
8 徐恒;猪圆环病毒2型单克隆抗体的研制和基于单抗的检测PCV2抗原的免疫组化法的建立及其初步应用[D];扬州大学;2010年
9 陈景容;猪圆环病毒2型灭活疫苗安全性与免疫效力试验[D];福建农林大学;2011年
10 龚乾龙;猪圆环病毒2型对昆明小鼠繁殖机能影响的研究[D];湖南农业大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张晓鹏 记者 李丽云;国内首创“猪圆环病毒新一代疫苗”研制成功[N];科技日报;2010年
2 张晓鹏;“猪圆环病毒疫苗”全国推广[N];农民日报;2010年
3 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会 万遂如;猪圆环病毒2型感染的综合防控技术[N];中国畜牧兽医报;2009年
4 张晓鹏 记者 彭溢;“猪圆环病毒疫苗” 在哈兽研研制成功[N];黑龙江日报;2010年
5 记者 尹江勇;“猪圆环病毒疫苗”技术实现国产化[N];河南日报;2010年
6 记者 乔地 通讯员 闻亚丽;“猪圆环病毒”疫苗批准上市[N];科技日报;2010年
7 沙河市动物医院 付丽伟;一例猪圆环病毒和副嗜血杆菌混感的诊治[N];河北科技报;2009年
8 李凯年 译;日本韩国发现猪圆环病毒感染[N];中国畜牧水产报;2001年
9 本报记者 乔地 通讯员 马焱 郑世孝;科技创新,走在富民强国的路上[N];科技日报;2010年
10 记者 鲁焰;拜城100万吨PCV项目开工[N];新疆日报(汉);2010年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978