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莫氏巴贝斯虫在我国的流行状况调查及马达复合物组件蛋白基因的初步研究

王锦明  
【摘要】:羊巴贝斯虫病(Ovine babesiosis)是由媒介蜱传播的血液原虫病;感染动物表现发热、贫血、黄疸、血红蛋白尿等临床症状,严重感染时甚至会有引起死亡。该病的流行状况与媒介蜱的分布相一致,全球所有的热带、亚热带和温带都有流行,严重制约养羊业的健康持续性发展。我国对该病的研究起步晚,而且我国的羊巴贝斯虫病的病原具有自身的特点,本研究针对我国低致病力的莫氏巴贝斯虫的流行状况及滑动体组件蛋白基因进行了初步的探索性研究。 利用莫氏巴贝斯虫裂殖子可溶性抗原建立的ELISA方法,对我国低致病力的莫氏巴贝斯虫(莫氏巴贝斯虫临潭株和莫氏巴贝斯虫天祝株)具有良好的特异性(特异性为95.5%)。因此,为了了解我国羊巴贝斯虫病的流行状况,本研究应用该方法对采自我国22个省44个县的3204份血清样品进行了检测。结果显示在调查的所有省份中都有莫氏巴贝斯虫的感染,阳性率从1.6%到91.0%不等,其平均感染率为43.5%。 根据GenBank已报道的顶复门原虫滑动体组件蛋白基因(gap45、gap50、myosin A、mlc、actin、aldolase、trap),进行基因序列的分析比对,在相关基因的保守区域设计RACE扩增引物,利用末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends, RACE)技术从莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA中扩增上述滑动体组件蛋白基因,将获得的全长或基因的部分序列构建pGEX-4T-1原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLys中用IPTG诱导表达;融合蛋白经纯化后免疫家兔,制备多克隆抗体,用ELISA和western blot方法测定抗体的效价及反应性,并用制备的多克隆抗体对莫氏巴贝斯虫裂殖子天然蛋白进行识别。结果表明,成功获得了莫氏巴贝斯虫裂殖子滑动体组件蛋白基因(gap45、gap50、myosin A、mlc、actin、aldolase、trap),其基因全长分别为664bp、1391bp、2538bp、773bp、1110bp、1199bp和2254bp,开放阅读框大小分别为567bp、1194bp、2514bp、606bp、1005bp、1074bp和2100bp。制备的多克隆抗体具有较好的特异性,效价均高于1:25600。其中GAP45、GAP50、MyoA和Aldolase的多克隆抗体可以特异性的识别莫氏巴贝斯虫裂殖子天然蛋白。 本研究首次在全国范围内开展了莫氏巴贝斯虫感染的血清流行病学调查,为将来在全国范围内开展羊巴贝斯虫病的防治计划,提供了第一手较为全面的流行病学数据;同时为进一步开展巴贝斯虫运动和入侵宿主细胞的研究,获得了初步的生物学研究材料。


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