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苜蓿内生菌的分离及生防菌株的筛选与鉴定

陈孝利  
【摘要】:苜蓿(alfalfa)是奶牛等草食动物的重要优质饲草之一,被誉为“牧草之王”。内生菌是在植物组织中定植的微生物(通常是细菌、真菌和放线菌)。它们能够产生许多生物活性次生代谢产物,如生物碱、酚酸、醌、类固醇、皂苷、单宁和萜类化合物,作为抗微生物、抗昆虫和抗癌等性能的潜在候选者,也是微生物农药的重要资源。本文分离筛选苜蓿内生菌并评价其生防潜力,结果如下:1、苜蓿内生菌的分离2015-2016年从河北、内蒙古、宁夏共采集符合采集条件的苜蓿样品108株,采用组织研磨法分离获得409株内生菌。其中,细菌306株,真菌101株,放线菌2株。内生菌有125株菌株从苜蓿叶中获得,101株菌株从苜蓿茎中获得,183株菌株从苜蓿根中获得。2、苜蓿内生菌离体平板拮抗评价通过平板拮抗试验,从2015年分离的362株内生菌中筛选出35株对立枯丝核菌、苜蓿镰刀菌、黄瓜枯萎病菌和疫霉菌中至少一种病原菌有抑菌作用菌株。其中,12株内生菌对4种病原菌有拮抗效果,为细菌3株,真菌8株,放线菌1株。内生细菌NA NX36L-1对4种病原菌的抑菌效果最好,均达到了抑菌活性极强,鉴定为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)。内生真菌PDA NM2S-4对4种病原菌的平均抑制率最高,为81.2%,鉴定为哈茨木霉(Trichoderma harzianum)。3、苜蓿内生菌活体防病评价通过试管苗检测2015年分离的362株内生菌对黄瓜枯萎病的生防效果,结果有37株叶部相对防效≥60%,其中NA NX51R-5、NA HB1S-3和NA NM1S-1防效最好,达到了84%以上。有21株根部防效达到60%以上,其中NA NX90R-8防效最好,达到了84%。对筛选获得37株优异菌株,再次进行黄瓜枯萎病活体评价试验,最终筛选出3株高效的生防潜力细菌菌株NA NX51R-5、NA NX90R-8和NA NM1S-1。4、高效生防潜力菌株对苜蓿根腐病的防治作用对筛选获得的上述3株具有优异生防活性的内生细菌进行了苜蓿苗培养皿试验、苜蓿试管苗试验和盆栽试验,结果表明3种内生菌对苜蓿不致病,且NA NM51R-5和NA NM1S-1在适当浓度时对苜蓿有促生作用,对尖孢镰刀菌造成的苜蓿根腐病具有明显的防治作用。其中NA NM1S-1盆栽相对防效为57.1%。5、内生菌分子鉴定使用现代分子生物学手段,对离体平板拮抗试验中有抑菌效果菌株进行了分子鉴定。结果表明26株内生细菌分属于6个属,其中芽胞杆菌属(Bacillus spp.)和假单胞菌属(Pseudomonas spp.)属于优势菌种。8株内生真菌分属于3个属,其中哈茨木霉为优势种。对选出的3株高效生防菌的分子鉴定表明,NA NM1S-1和NA NX51R-5为芽胞杆菌(Bacillus spp.),NA NX90R-8为假单胞菌属(Pseudomonas spp.)。


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