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貂源肺炎克雷伯菌的生物学特性及致病性研究

韩坤  
【摘要】:肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kp)属于条件致病菌,常侵袭人和动物的呼吸道、消化道和泌尿生殖道,引起人和动物的多种疾病。是引起毛皮动物(水貂、狐、貉)肺炎的主要病原菌,本研究通过对貂源肺炎克雷伯菌生物学特性和致病性研究,旨在为临床上毛皮动物肺炎克雷伯菌病的检测及防治提供参考。1.貂源肺炎克雷伯菌的分离与生物学特性研究本研究于2015年至2018年间,对山东、辽宁及黑龙江地区有呼吸道症状的水貂进行肺脏细菌分离。通过形态观察、细菌鉴定仪及PCR等鉴定方法,共计从168份样品中分离出31株肺炎克雷伯菌,分离率为18.4%。并对分离株的荚膜血清型、产生物被膜能力、耐药性、毒力基因和耐药基因进行了分析。结果表明,夹膜血清型中K2型有3株,K54型为1株,其他血清型菌株未检测到;有1株肺炎克雷伯菌具有强的产生物被膜能力;药敏结果表明,20株分离株具有多重耐药性。耐药基因TEM、SHV、CTX-M、Acr AB、tol C、mdtk、Omp K35、gyr A及par C的检出率分别为71%(22/31)、81%(25/31)、39%(12/31)、90%(28/31)、90%(28/31)、61%(19/31)、84%(26/31)、77%(24/31)和84%(26/31),未检测到外膜蛋白基因Omp K36;其中有2株菌同时含有9种耐药基因,13株菌同时含有8种耐药基因;毒力基因检测结果表明fim、ure A、wab G、rmp A、kfu、alls、iuc B、uge及Ab的检出率分别为23%(7/31)、77%(24/31)、68%(21/31)、10%(3/31)、13%(4/31)、16%(5/31)、13%(4/31)、48%(15/31)和10%(3/31),仅在1株细菌中检测到毒力基因ybt A,未检测到iro NB基因。有3株细菌同时含有黏液表型调节因子A基因rmp A和菌素相关基因Ab,且这3株菌同为K2血清型和高黏液表型,分别是Kp-SD-11、Kp-SD-16和Kp-SD-18菌株。2.貂源肺炎克雷伯菌致病性研究根据分离菌株血清型、毒力基因及高黏表型检测结果,选择Kp-SD-11(K2型)、Kp-SD-16(K2型)和Kp-DL-33(K54型)三株菌为代表菌株,进行人工感染小鼠和水貂试验,测定了代表菌株对小鼠和水貂的LD50。并通过病理切片观察分析该菌的致病性。经腹腔注射感染小鼠后5~6 h,实验组小鼠开始出现临床症状,主要表现为眼角有砖红色分泌物结痂,8~9 h开始出现死亡,剖检死亡小鼠,可见腹腔内有大量渗出液,肝脏、脾脏和肺脏均有出血点,以肺脏较为明显。持续观察7 d,并统计死亡数。通过气管内滴入法感染水貂8 h后,水貂出现背毛粗乱,精神迟钝。最早出现死亡的时间为18 h。剖检死亡水貂,可见肝、脾、肺及气管均有出血点。且从死亡小鼠和水貂的多个脏器组织均能重分离到肺炎克雷伯菌。病理组织学观察可见肺泡壁增厚,淤血;肝、脾和肾均有淤血。Kp-SD-11、Kp-SD-16和Kp-DL-33菌株对小鼠LD50分别为9.4×102.5CFU、9.8×102.3 CFU和1.7×105.8 CFU;对水貂的LD50分别为9.4×104.2 CFU、9.8×104.8 CFU和1.7×107.8 CFU。证实K2型貂源肺炎克雷伯菌的毒力较K54型强,具有较高的致病性。为建立貂源肺炎克雷伯菌对小鼠和水貂的致病性模型提供了基础数据。


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