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甘、青、宁地区奶牛乳房炎葡萄球菌分子特性研究

徐结  
【摘要】:奶牛乳房炎一直都被公认为世界性难题,它不仅使牛的产奶量下降,还影响着牛奶的品质,严重的危害着奶牛的健康,而且还会给公共安全带来隐患,严重威胁着人类的健康。本研究对西北地区养殖场中的乳房炎奶样进行了细菌的分离,然后对分离株菌株进行13种药物的耐药表型及31种相关耐药基因的检测、毒力基因的携带率以及生物膜形成能力的测定,并采用多位点序列分型、葡萄球菌A分型、脉冲场凝胶电泳分型和葡萄球菌盒式染色体mec分型等方法对分离的葡萄球菌进行克隆关系分析,以确定葡萄球菌在西北地区奶牛养殖场的耐药状况及优势克隆。进行了578份奶牛乳房炎样品的分离鉴定。共分离出215株葡萄球菌,其中65株金黄色葡萄球菌,39株溶血葡萄球菌,38株模仿葡萄球菌,28株松鼠葡萄球菌,20株腐生葡萄球菌,产色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和马胃葡萄球菌分别为10株、9株和6株。测定了临床常用的13种药物分别对215株葡萄球菌分离株MIC值。结果显示几乎所有的葡萄球菌对红霉素、林可霉素和卡那霉素的耐药率都超过了50%,溶血葡萄球菌对红霉素和林可霉素的耐药率甚至超过了90%,产色葡萄球菌更甚,对红霉素和林可霉素的耐药率达到了100%,其中金黄色葡萄球菌、模仿葡萄球菌、松鼠葡萄球菌和腐生葡萄球菌对除了万古霉素和利耐唑胺敏感外,对其余11种抗生素都有耐药的情况出现。进行了葡萄球菌对13种抗生素相关的31个耐药基因检测。结果表明,耐药基因型与耐药表型结果总体一致,大多数耐药菌株至少携带2种耐药基因,在65株金黄色葡萄球菌中,ermC携带率为81.5%;aacA-aphD为76.9%;gyrA和lnuA均携带率为73.8%;aadD和cfr携带率都为63.1%;tetM和tetK分别为58.5%和46.1%,vga和rpoB的检出率分别为7.7%和1.5%;mecA为27.6%,未检测到万古霉素和利耐唑胺类药物相关的耐药基因。150株CNS葡萄球菌中,erm(B)、vga、blaZ、mecA、tet(M)、tet(L)、tet(K)、cfr、fexA、aacA-aphD、aadD、glrA、glrB和ropB基因携带率分别为52.0%、14.7%、50.0%、30.0%、8.7%、28.7%、8.0%、45.3%、14.7%、66.7%、16.7%、27.3%、28.0%和2.7%。完成了所分离葡萄球菌生物膜形成能力及相关毒力基因检测。有124株(51.6%)葡萄球菌具有生物膜形成能力,其中金黄色葡萄球菌47株(72.3%)、溶血葡萄球菌23株(59.0%,)、模仿葡萄球菌18株(47.3%)、松鼠葡萄球菌19株(50.0%)、腐生葡萄球菌5株(25%)、产色葡萄球菌4株(40.0%)和表皮葡萄球菌8株(88.9%)。另91株(42.3%)葡萄球菌没有生物膜形成能力。在具有生物膜形成能力的葡萄球菌中,毒力基因sea、luks和lukf在三种不同生物膜强度的葡萄球菌中出现的频率相似;毒力基因hla(93.8%)和clfA(62.5%)在弱生物膜形成能力的葡萄球中出现的频率最高;毒力基因clfB(74.4%)在中等生物膜形成能力的葡萄球菌中出现的频率最高;毒力基因seb(60.6%)、tsst(72.7%)、coa(72.7%)、fnbA(100.0%)、fnbB(97.0%)、icaA(100.0%)和icaB(100.0%)在强生物膜形成能力的葡萄球中出现的频率最高。采用不同方法进行了所分离菌株的基因分型。谱型ST15-A1-t803的金黄色葡萄球菌分离株是该地区的主要流行类型,属于CC1,其中SCCmec IV是该区域MRSA株的主要流行菌株,有5株。MRCNS主要以SCCmec Ⅱ型为优势菌株,有15株,其次是SCCmec Ⅲ型。


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