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簇毛麦抗白粉病基因的染色体显微切割及其抗病相关基因克隆的研究

孔凡晶  
【摘要】: 小麦白粉病是影响我国小麦生产的主要病害,培育抗病品种是防治病害 的经济有效的途径;而抗病基因的研究则是抗病育种的基础。目前,已定名 的抗小麦白粉病基因有29个位点,45个主效基因,并已进行了染色体定位 及找到了相应的分子标记,但仍没有一个抗病基因克隆成功。本研究以引自 原苏联的簇毛麦为白粉病抗源选育的6D/6V代换系RW15为供试材料,以染 色体显微切割技术为主线,进行6V染色体上抗白粉病基因的克隆,主要研 究内容是:创制6VS单端体、双端体异代换系材料;构建、筛选6VS特异 文库;利用已克隆抗病基因的保守域设计引物,从6VS端体扩增抗病基因同 源序列;构建小麦-簇毛麦易位系的cDNA文库,并以抗病基因同源片段为探 针对文库进行筛选,获得如下主要结果: 1.利用组织培养、抗病性鉴定、细胞遗传学分析和原位杂交获得了6VS/6D 单端体、双端体异代换系H1-2和H1-2-6。 2.采用玻璃针显微切割、“单管”技术体系及LA-PCR,构建了6VS DNA特 异质粒文库。文库含有17000个重组克隆,插入片段长度从100-1500bp, 平均600bp;63%的插入序列克隆为单/低拷贝,37%为多拷贝。 3.从文库中筛选到5个多拷贝簇毛麦专化序列pHVMK134、pHVMK137、 pHVMK125、pHVMK130和pHVMK67。3个簇毛麦专化单拷贝序列pHVMK22、 pHVMK15和pHVMK129。其中,pHVMK22可以作为探针在小麦遗传背景下 进行簇毛麦抗白粉病基因的检测。 4.利用已克隆抗病基因的保守域设计了7对引物,从6VS端体DNA中扩 增出10类抗病基因同源片段Hvrgak1-Hvrgak10(GenBank登录号为 AF387113-AF387120,AY040671,AY040672)。抗病同源序列与小麦抗 白粉病基因的连锁分析表明,Hvrgak2、Hvrgak4和Hvrgak5与抗病基 因相关。 5.构建了小麦-簇毛麦易位系的cDNA文库,克隆载体为λZAP。文库滴度 为3.5×10~5,插入片段0.4-4.3kb,平均1.8kb。 6.从cDNA文库的1.2×10~6个克隆中经两次筛选获得四个阳性克隆:kong1 插入片段2.9kb;kong28,插入片段1.3kb;kong32,插入片段1.2kb; kong36,插入片段1.1kb。对这些插入片段的Southern分析表明均为阳 性。 7.利用差异显示技术共获得10个差异。DNA片段,有两个Northern分析为 阳性。序列分析表明,R3习为 840hp,在 GenBank中没有发现同源性较高 的植物基因序列;8CI.36为 587hp,同玉米的 tbl基因*七8区段有 100% 同源性,与 sphenostylis stenoc地a Ill类几丁质酶基因 15-56区段有 100%同源性。


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1 D.W.Sunderman;田笑明;;春小麦 PI 468960的白粉病和小麦蝇蚊抗性间的关系[J];麦类作物学报;1989年02期
2 阎新甫;刘文轩;胡学义;;抗白粉病基因导入小麦获得突破[J];河南农业科学;1990年11期
3 ;抗性育种[J];麦类文摘;1994年01期
4 贾继增;;小麦抗白粉病基因及抗源[J];麦类作物学报;1990年05期
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9 ;小麦抗白粉病基因资源的利用评价[J];江苏农业科学;1984年01期
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13 杨光;;我国发现小麦白粉病抗性基因[J];农药市场信息;2011年15期
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15 杨足君,李光蓉,任正隆;簇毛麦抗白粉病基因向四川小麦转移的分子标记育种研究[J];四川农业大学学报;2000年03期
16 王立新,常利芳,段绍光,徐民新,王凤格,孙家柱;通过花粉管通道导入外源DNA创造抗白粉病小麦新种质[J];中国农业科学;2003年12期
17 张庆勤;;抗源累加杂交在小麦抗病育种中的应用[J];种子;1981年01期
18 姚景侠,杨芳彬,赵毓美;白免3号小麦抗白粉病基因单体分析[J];作物学报;1982年03期
19 盛宝钦,周益林;小麦慢发性抗白粉病品种鉴定[J];农业新技术;1990年03期
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10 刘志勇;宋伟;华为;赵军;解超杰;孙其信;杨作民;;野生二粒小麦2B染色体抗白粉病基因微卫星标记定位[A];第二届热带亚热带植物资源的遗传多样性与基因发掘利用研讨会论文集[C];2006年
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1 孔凡晶;簇毛麦抗白粉病基因的染色体显微切割及其抗病相关基因克隆的研究[D];中国农业科学院;2001年
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