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辣椒花药培养的研究

王立浩  
【摘要】: 本文研究采用了海花3号、新丰5号、prennial×77013B、灯笼椒 ×83-58等四个材料,着重对辣椒花药培养中褐化问题,不同基因型 材料对培养条件、培养基成分的不同要求、培养基最佳组成,以及碳 源、氮源的差别等问题进行了研究与探讨。 文中研究了小孢子发育时期与花蕾外部形态之间关系,确定了花 蕾中小孢子多数处于单核靠边期时的花蕾形态指标。当花蕾花冠微露, 萼瓣等长或瓣稍长;花药白绿色,顶端稍紫时,花蕾中小孢子多数处 于单核靠边期,但对应的花蕾大小在材料之间差异较大。 基于1981年Dumas的培养基和培养方法,其它条件不变的情况 下,cp培养基中采用不同浓度下的2,4-D、NAA配合KT对花药培 养出胚率做了比较。结果表明在所用的激素种类和浓度变化范围内, 胚发生率比较低,差别也不明显。但基因型对花药培养的胚发生率的 影响较大。 采用正交试验研究了碳源(蔗糖、麦芽糖)、氮源(添加水解酪蛋 白)、活性炭、核酸、AgNO_3、Vc、激素对花药培养褐化程度、愈伤组 织生成率、胚发生率的影响。对数据进行直观分析和方差分析,对不 同材料做了比较。结果表明: 碳源是所有影响因素中最显著影响花药培养胚发生率的因素,用 3%的麦芽糖代替蔗糖大大提高了实验材料的胚发生率; 不同取蕾时期对花药培养影响较显著,取蕾时间越晚越不利于胚 状体的发生; 一定浓度的AgNO_3、Vc能通过减轻褐化提高愈伤组织的发生率, 提高胚发生率,其中Vc的效果更好一些,加入浓度为50μmol/L时能 提高胚发生率,浓度过高反而使胚发生率下降; 高浓度的2,4-D能提高愈伤组织的发生率;激素对胚状体发生率 影响材料之间有差异,海花3号中,低浓度的激素比高浓度的激素效 果好,2,4-D比NAA的效果好;新丰5号和灯笼椒×83-58反映的规 律类同,但高浓度的NAA却比低浓度的效果更好; 活性炭能明显抑制愈伤组织的发生,对胚发生率没有明显的促进 作用; 其它因素,添加500mg/L水解酪蛋白使胚状体的诱导率略有下降, 添加50mg/L核苷酸影响效果不显著。 通过正交试验得到三个基因型特异的优化培养基配方,并且通过 比较得到对于三个基因型都比较适用的培养基配方。 基因型对花药培养的胚发生率有显著的影响,基因型影响着一定 条件下胚发生率的高低,在激素单因素试验,正交试验中都有相同结 果,海花 3号胚的发生率最高;新丰 5号、灯笼椒 X 8368次之;preedal X 77013B最低,试验过程中,始终未见胚状体发生。 对培养中小抱子的发育过程,对胚状体的发生、发育过程做了细 胞学、组织学观察。观察到小抱子早期分裂存在均等分裂,小抱子分 裂启动后,经细胞团、愈伤组织、心型胚、鱼霄胚、子叶胚,发育成 植株。对花药培养所得植株,根尖染色进行倍性鉴定,结果部分为单 倍体,部分为二倍体。


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