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中国大陆H9N2亚型禽流感病毒遗传演化关系的研究

李曦  
【摘要】: 本研究对1994年-2001年,分离自中国大陆的30株H9N2亚型禽流感病毒的不同分离株,进行了抗原交互性测定及其血凝素基因的序列分析。 首先使用常规的检测流感病毒的血凝抑制实验(Hemagglutinin Inhibition,HI),针对不同毒株所获得的鸡抗血清分别与自身抗原和其他抗原进行血凝抑制实验,检测不同毒株间的抗原性的差异。 通过比较中国大陆H9N2亚型禽流感病毒不同分离株间的抗原性差异,可以看到我国毒株之间,抗原性变异表现较为复杂。中国大陆是多个病毒异变体共存的环境。且在同一地域内,不同的异变体之间的差异较小,随着时间的推移,其变异并不明显;但在不同的区域内分离的毒株之间变异较为突出,这表明中国大陆H9N2亚型禽流感病毒不同分离株抗原性是与地域的改变而发生较为明显的变异。也正是由于我国不同地区分离株之间的抗原性差异,所以导致现在正在广泛应用的油乳剂灭活疫苗的在全国各地鸡群中的保护效力参差不齐。另外,在比较中还发现,广西分离株GX1/99,GX10/99、石家庄分离株SZJ/2/98、福建分离株FJ/25/00抗原性的变异较为突出。 流感病毒的血凝素HA蛋白是流感病毒的主要抗原之一,其抗体能中和流感病毒的感染,是主要的保护性抗体。本实验将在中国大陆1994年至2001年期间,不同地区、不同年代和不同宿主中分离到的H9N2亚型禽流感病毒株,应用逆转录聚合酶链反应RT-PCR扩增出该亚型病毒的血凝素基因HA,经测序,获得的30株中国大陆H9N2亚型禽流感病毒分离株的核苷酸序列。应用计算机分析软件,对不同毒株的核苷酸序列及其所推导的氨基酸序列的异同性进行比较,并应用系统发育分析软件,建立HA1的系统发育树,并对其中受体结合位点发生较大变异的毒株进行了详细的分析。研究发现,我国大陆的分离株中,发现了潜在的可感染人的禽源毒株,我们称之为新型禽源毒。同时,初步推断出我国H9N2亚型禽流感病毒的走向:广东作为我国主要的H9N2亚型禽流感病毒的引入地域,是我国该亚型禽流感病毒的初级来源;河南等中部地区,则因为种间传播发生频繁,而成为生产新型毒株的基地,同时也是常规型病毒株与多种变异毒株共存的区域,因此可作为二级病毒传播的存储库;北方,以黑龙江为主,主要形成禽源毒株的强势变异;河北则可以作为病毒传播的一个载体,在此,病毒基本不发生明显改变;其他地域,上海、山西、南京、山东等我国中部地区,则是一个逐步形成变异的阶梯。该理论体系的形成,为今后对禽流感的预报预测奠定了理论基础,提供了理论依据。


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