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菜氏野村菌致病性和生物学特性的研究

李锋  
【摘要】: 本文以莱氏野村菌Nomuraea rileyi(Farlow)Samson福建菌株为研究对象,首次对其致病性、生物学特性、大量培养方法进行了系统研究,以期为该菌的应用提供基础,主要结果如下: 生物测定结果表明莱氏野村菌对夜蛾科的甜菜夜蛾Laphygma exigua(Hübner)和斜纹夜蛾Prodenia litura(Fabricius)的2~5龄幼虫均有较强的致病力,低龄幼虫较高龄幼虫的敏感性更强。此外该菌还可寄生棉铃虫Heliothis aimigera(Hübner)和粘虫Leucania separata(Walker),而对小菜蛾Plutella xylostella(Linnaeus)、大蜡螟Galleria mellonella Linnaeus等昆虫无感染性。 通过生物学特性的研究,明确莱氏野村菌菌丝生长的最佳碳源为可溶性淀粉,最佳氮源为鱼蛋白胨,适宜的碳氮比为30~60:1,添加微量元素Cu对菌丝生长有促进作用,而维生素无明显的影响,菌丝生长的最适pH值为5~7,当摇床转速为200±10rpm,接种量为1%左右时菌丝产量最高;该菌株菌落生长的最佳碳源是棉子糖,最佳氮源是酵母浸粉,碳氮比为5:1,添加微量元素Cu和维生素H对菌落生长有明显地促进作用,菌落生长的最适pH值为5~7,最适温度为25~27℃,24h光照时菌落生长最快;该菌株产孢的最佳碳源是乳糖和麦芽糖,最佳氮源为牛肉蛋白胨,适宜的碳氮比为30~60:1,加入微量元素Mn和维生素H或B_1对产孢有促进作用,该菌株产孢需要光照,以24h为宜,最适温度为25℃,pH值为6~7。 温度为25~27℃,pH值为6~7,24h光照时对莱氏野村菌分生孢子萌发最为有利。 根据该菌产孢的营养特性,选择对产孢有利的营养因子,通过两次正交优化试验,筛选出对产孢较为适宜的培养基配方,即:乳糖50g/L、牛肉蛋白胨5g/L、酵母浸粉5g/L、维生素B_120mg/L,莱氏野村菌在该培养基上的产孢量与萨氏麦芽糖蛋白胨+酵母浸粉(SMAY)培养基上无显著差异,但成本却降低了60%。 实验结果表明莱氏野村菌在大豆、小麦和高粱等基质上均可产孢,14d时以大豆基质上的产孢量最高,在大豆中加入1%的乳糖可以明显地提高产孢量,加入酵母浸粉对产孢量无显著影响。实验表明以萨氏麦芽汁蛋白胨+酵母浸粉(SM'Y)液体培养基培养菌丝体,然后接种到大豆基质上进行液固两相法来大量培养分生孢子效果较好。


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