收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

马传染性贫血病毒基因转移载体系统的构建及分析

孙成群  
【摘要】:慢病毒如同其它逆转录病毒,可以将前病毒基因组持久地整合到感染细胞的染色体上并且在感染的细胞和子代细胞中表达病毒基因,可以作为将目的外源基因引入细胞的载体。由于慢病毒除了能够感染分裂状态的细胞外还具有感染非分裂细胞的能力,因而,慢病毒载体备受关注。以HIV-1为基础的慢病毒基因转移载体是目前研究最为透彻的慢病毒载体。尽管已经在增加HIV载体的生物安全性和减少产生具备复制能力的病毒方面做了很多改进,但要应用于人类临床实验仍然存在较大的安全隐患。因此,开发非灵长类慢病毒基因转移载体系统成为当前研究的热点之一。 马传染性贫血病毒(Equine Infectius Anemia Virus,EIAV)是一种非灵长类慢病毒,而且是基因组结构最简单的慢病毒。中国EIAV驴白细胞弱毒疫苗株(EIAV-DLA)是目前唯一成功开发并大规模应用的慢病毒疫苗。本研究的目的在于利用我国在马传染性贫血病毒(EIAV)研究上的成果,在EIAV驴白细胞弱毒疫苗株的感染性克隆(pOK8266)的基础上,构建有中国特色的EIAV基因转移系统,为基因治疗、疫苗的开发和马传染性贫血病毒或其它相关的病毒的致病机制和免疫机制的研究提供一个新的研究手段。 本实验利用反向遗传操作技术,以EIAV驴白细胞弱毒疫苗的感染性克隆质粒(pOK8266)为基础,用CMV立即早期启动子替换了EIAV-5'LTR-U3区,以及载体中加入内部启动子、乙型肝炎病毒转录后调节元件(HPRE)和中央聚嘌呤序列(cPPT)/Rev反应元件(RRE)对载体进行修饰,构建了系列复制缺陷性EIAV载体质粒。同时将EIAV基因片段插入不同真核表达载体中构建了囊膜缺失的EIAV gag/pol表达质粒。而且克隆水泡性口炎病毒囊膜糖蛋白(VSV-G)基因并构建了不同的提供囊膜伪型的VSV-G的真核表达载体质粒,建立了EIAV三质粒基因转移载体系统。 实验结果表明用CMV立即早期启动子替换了EIAV-5'LTR-U3区的复制缺陷型EIAV载体转染或制备的载体病毒转导293T细胞能够有效地表达报告基因-增强绿色荧光蛋白(EGFP)。具有内部启动子载体转染后EGFP的表达明显高于无内部启动子的载体,说明增加一个内部启动子能够提高转基因的表达。反向插入HPRE的载体转染后未见有EGFP的表达,表明反向插入HPRE可以抑制EGFP的表达,而这种抑制作用可以被cPPT/RRE所纠正。正向插入HPRE的载体转染后未见对EGFP的表达有明显的抑制作用,说明HPRE的作用是方向特异性的。载体中增加中央聚嘌呤序列(cPPT)和Rev反应元件(RRE)等cis作用元件能够明显地增加报告基因的表达。构建的VSV-G表达载体在VSV-G基因前增加一个内含子能够明显地增加VSV-G的表达,而EIAVgag/pol表达载体却得出相反的结果,说明内含子可以增加VSV-G表达载体的蛋白表达,但是不能增加EIAVgag/pol载体的蛋白表达。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 彭万强;;兽医病毒及其在现代病毒分类学上的位置[J];广东畜牧兽医科技;1986年03期
2 何翔,邵一鸣,薛飞,范秀娟,贾斌,赵全壁,沈荣显;感染性马传染性贫血病毒嵌合克隆的构建[J];病毒学报;2003年02期
3 王柳,童光志,仇华吉,谷守林,涂亚斌,杨志彪;马传染性贫血病毒弱毒疫苗株感染性分子克隆的构建[J];中国农业科学;2003年12期
4 温建新,仇华吉,涂亚斌,王柳,彭金美,童光志;带有组氨酸标签的马传染性贫血病毒感染性分子克隆的构建[J];中国预防兽医学报;2005年03期
5 张得禄;古丽尼沙;;近年巴州马传染性贫血病净化概况[J];农村科技;1997年09期
6 王柳,杨志彪,仇华吉,张绍杰,孟松树,童光志;马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒株LTR启动子功能的研究[J];中国预防兽医学报;2000年06期
7 赵冲生;储志平;昝福云;;罗平县马传染性贫血的流行病学调查及防制[J];中国兽医杂志;2006年05期
8 杨威,张宝山,刘永刚,刘胜旺,孔宪刚,曹殿军,刘相冬,卢景良,刘宝全,刘建华;马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗gag基因的序列测定及分析[J];病毒学报;2000年04期
9 王全凯,庞海,孔宪刚,宣华,章金刚,卢景良,费恩阁;马传染性贫血病毒env gp90基因在实验感染马体内的遗传变异(英文)[J];中国兽医学报;1999年03期
10 谷守林,高磊,蔡红,荣骏弓,李成;三种动物慢病毒形态及形态发生的比较研究[J];电子显微学报;2002年02期
11 朱远茂,薛飞,赵立平,相文华;马传染性贫血病毒囊膜基因的研究进展[J];中国生物工程杂志;2004年07期
12 王柳,童光志,刘红全,杨志彪,仇华吉,孙宪刚,王玫;马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株及其亲本强毒株前病毒核苷酸序列比较分析[J];中国科学C辑;2001年06期
13 王柳,于力,张绍杰,仇华吉,王玫,童光志;马传染性贫血病毒弱毒株LTR的克隆及序列分析[J];中国兽医学报;1998年01期
14 王晓钧,魏丽丽,相文华,张晓燕,吕晓玲,赵立平,朱远茂,邵一鸣,沈荣显;中国马传染性贫血病毒驴强毒株感染性分子克隆的构建[J];中国农业科学;2005年09期
15 耿庆华;王晓钧;赵立平;吕晓玲;沈荣显;相文华;;马传染性贫血病毒美洲流行株与我国弱毒疫苗株鉴别诊断方法的研究[J];中国病毒学(英文版);2006年01期
16 耿庆华;郭巍;赵立平;吕晓玲;相文华;周建华;;S2基因失活突变马传染性贫血病毒感染性克隆的构建及感染性研究[J];中国预防兽医学报;2010年07期
17 周家喜,张宝山,刘永刚,孔宪刚,刘胜旺,孙成群,刘相东;EIAV反式激活蛋白(TAT)基因的分子克隆与序列测定[J];中国兽医学报;2002年02期
18 王晓钧,魏丽丽,范秀娟,吕晓玲,相文华,张晓燕,邵一鸣,沈荣显;马传染性贫血病毒疫苗致弱过程中不同代次毒株LTR序列变异[J];中国预防兽医学报;2005年03期
19 杨旭艳;张淑琴;王雪峰;曹贵方;周建华;;马传染性贫血病毒受体插入型基因的原核表达[J];动物医学进展;2009年03期
20 张萍;于在江;韩秀娥;王雪峰;朱远茂;周建华;魏萍;;马传染性贫血病毒基质蛋白p15单克隆抗体的制备[J];中国预防兽医学报;2009年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王立明;;慢病成因与社会干预[A];新世纪预防医学面临的挑战——中华预防医学会首届学术年会论文摘要集[C];2002年
2 花群义;张念祖;周晓黎;董俊;杨云庆;徐自忠;;核酸识别快速检测水泡性口炎病毒和定型的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
3 盛祖勋;陈义平;王志亮;赵永刚;萨仁高娃;王宝安;;印第安纳型水泡性口炎病毒核蛋白基因在大肠杆菌中的表达和鉴定[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
4 温建新;童光志;仇华吉;涂亚斌;吴东来;王柳;;带有分子标记的马传染性贫血病毒弱毒株的构建[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
5 张允岭;高芳;孟繁兴;金香兰;侯小兵;;从血管源性认知障碍辨识筛查谈社区慢病中医药防控体系建立[A];第十二届中国科协年会22分会场——“中医药在重大公共卫生事件中的地位和作用论坛”论文集[C];2010年
6 张允岭;高芳;孟繁兴;金香兰;侯小兵;;从血管源性认知障碍辨识筛查谈社区慢病中医药防控体系建立[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
7 涂亚斌;王柳;刘红全;仇华吉;童光志;;马传染性贫血病毒(EIAV)嵌合感染性分子克隆的体外构建[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
8 李璟;;科研项目进社区对慢病规范化管理的作用[A];中国心脏大会(CHC)2011暨北京国际心血管病论坛论文集[C];2011年
9 王柳;童光志;刘红全;杨志彪;仇华吉;孔宪刚;王玫;;马传染性贫血病毒弱毒疫苗及其亲本强毒L株前病毒核苷酸序列比较分析[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
10 花群义;杨云庆;董俊;周晓黎;杨晶焰;徐自忠;张念祖;;水泡性口炎病毒核蛋白基因的表达及初步应用[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙成群;马传染性贫血病毒基因转移载体系统的构建及分析[D];中国农业科学院;2004年
2 朱根福;中风—慢病管理系统的构建与实施[D];广州中医药大学;2011年
3 王晓钧;中国马传染性贫血病毒驴强毒株致病性分子克隆的建立及其生物学特性的研究[D];中国农业科学院;2003年
4 李红梅;马传染性贫血病驴白细胞弱毒疫苗细胞免疫机理的研究[D];中国农业科学院;2004年
5 魏丽丽;马传染性贫血病毒LTR嵌合克隆生物学特性的研究[D];东北农业大学;2005年
6 耿庆华;我国马传染性贫血弱毒疫苗株与美洲流行毒株鉴别诊断方法的建立及标记疫苗的研究[D];中国农业科学院;2006年
7 杨玉芳;用LMP1构建重组慢病毒载体及建立转基因小鼠模型[D];第一军医大学;2004年
8 涂亚斌;马传染性贫血病毒弱毒疫苗致弱过程中env基因的变异及LTR的作用[D];中国农业科学院;2005年
9 全滟平;中国马传染性贫血病毒LTR启动子活性及EIAV_(FDD)弱毒株生物学特性研究[D];中国农业科学院;2007年
10 张淑琴;马传染性贫血病毒受体选择剪接变异体的鉴定及功能性研究[D];内蒙古农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 魏丽丽;中国马传染性贫血病毒驴白细胞疫苗致弱过程中不同代次毒株LTR序列分析[D];东北农业大学;2004年
2 李明;山东省慢病防控机构与能力建设实证调查研究[D];山东大学;2011年
3 魏占英;应用“共同学习”方法提高社区慢病管理服务能力的研究[D];华中科技大学;2009年
4 魏占英;应用“共同学习”方法提高社区慢病管理服务能力的研究[D];华中科技大学;2009年
5 杨小虹;慢病管理对慢性肾小球肾炎生活质量的观察[D];广州中医药大学;2012年
6 周家喜;马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒及其亲本驴强毒转录调控的比较研究[D];中国农业科学院;2001年
7 于在江;马传贫病毒驴白细胞毒弱毒基质蛋白单克隆抗体的制备及其表位的初步鉴定[D];内蒙古农业大学;2007年
8 高华;马传贫病毒中国株S2基因原核表达及多克隆抗体制备[D];内蒙古农业大学;2009年
9 温建新;带有HIS标签的重组EIAV感染性分子克隆的构建[D];新疆农业大学;2003年
10 尹岚岚;伪型EIAV病毒的制备[D];新疆农业大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 王丽艳;社区慢病干预有了“教科书”[N];青岛日报;2005年
2 杨丽佳 毕晓红;粗粮馒头立功劳[N];健康报;2003年
3 张佩渠;行为干预防慢病[N];健康报;2002年
4 金永红;北京医保慢病管理改革开始试点[N];健康报;2005年
5 本报记者 李芳;警惕“慢病”杀手,加强群防群治[N];南京日报;2008年
6 燕冰徐词;慢病治疗与患者签协议[N];苏州日报;2008年
7 孟庆普 钱峰;王陇德细说营养指导与慢病防控[N];健康报;2004年
8 刘文革 丁晓玲 程守勤;老年慢病者寒冬防猝死[N];健康报;2007年
9 程守勤;老年慢病寒冬防意外[N];家庭医生报;2007年
10 钱峰;县级疾控机构慢病预防控制规范征求意见[N];健康报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978