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用体外法和体内法研究有机锰在肉仔鸡小肠中的吸收特点

计峰  
【摘要】:在本实验室前期肉仔鸡锰营养研究成果的基础上,本论文共进行了五个试验,进一步优化探讨了络合态锰的检测方法,并采用体外外翻肠囊法、体内原位结扎灌注肠段法和自然饲喂法研究有机与无机态锰在肉仔鸡小肠中吸收特点的差异。 试验一 有机锰络合率的研究 利用红外光谱法、凝胶过滤色谱法和阳离子交换平衡法,分析了甘氨酸锰的红外光谱特征、甘氨酸锰和蛋氨酸锰在pH7、0.1M Tris缓冲溶液中的络合率。结果表明:(1)所合成的甘氨酸锰在红外光谱图上表现出锰络合物的结构特征;(2)在本研究所设定的检测条件下,用凝胶过滤色谱法和阳离子交换平衡法均未检测到甘氨酸锰和蛋氨酸锰在pH7、0.1M Tris缓冲液中有络合锰的存在。本研究结果提示,由于锰离子形成络合物的能力比较弱,溶液中的络合锰在凝胶过滤和离子交换过程中,可能因络合平衡破坏而在分离过程中发生解离,从而未能检测出络合形态的锰,故不能由此就否定氨基酸锰溶液中无络合锰存在。 试验二 用外翻肠囊法研究有机锰在肉仔鸡小肠中的吸收特点 本试验用外翻肠囊法研究肉仔鸡十二指肠、空肠和回肠对无机锰和有机锰的吸收特点的差异。共包括2个试验,试验1中以硫酸锰为添加锰源,根据单位时间锰的吸收率与外翻肠囊培养时间的曲线关系确定最佳培养时间,试验2中应用此培养时间研究不同形态锰在肉仔鸡小肠中的吸收特点。试验1 采用单因子的完全随机试验设计,共设培养时间分别为20、40、60和80分钟的4个处理组。加锰培养液中锰的添加量为120μg/ml。将48只28日龄商品代AA肉公鸡随机分到以上的4个处理组,每组6个重复,每个重复2只鸡(为了扣除内源影响,其中的一只鸡作为零添加锰水平处理),每只鸡的十二指肠、空肠和回肠分别作为相应肠段外翻肠囊的一个重复。在试验2中,采用单因子安排的完全随机设计,共设8个处理组,分别为:硫酸锰组、甘氨酸锰螯合物组、蛋氨酸锰螯合物组、本实验室新近生物学利用率研究(李素芬,2002)中选用的弱络合强度的蛋氨酸锰(Mn-Met E)组、中等络合强度的氨基酸锰(Mn-AA A)组和强络合强度的氨基酸锰(Mn-AA B)组、硫酸锰与甘氨酸的混合物组及硫酸锰与蛋氨酸的混合物组。为了扣除内源影响,另设一组作为零添加锰水平处理。加锰培养液中 以各种锰源添加12Opg/ml锰,培养时间为30分钟。用与试验1中日龄相 同的AA肉公鸡72只,随机分到以上设置的9个组,每组8个重复,每个 重复1只鸡,每只鸡的十二指肠、空肠和回肠分别作为相应肠段外翻肠囊 的‘~·个重复。结果表明:(l)综合三个部位肠段的吸收情况,锰的吸收率 和培养时间在40分钟内呈线性关系,因此选择30分钟为试验2的培养时 间;(2)体外培养回肠肠囊对无机锰的吸收率一般是十二指肠和空肠的2一6 倍,而且随着培养时间的延长,甚至达到了9倍(P0.01);(3)回肠中锰 的吸收率受到添加锰源的显著影响(P二0.0533)。其中合成蛋氨酸锰中锰的 吸收率比硫酸锰增加了77.6%(P二0.0534),比合成甘氨酸锰增加了1 16.1% (p二0.0187)。中等络合强度的Mn一AAA中锰的吸收率比无机硫酸锰和甘氨 酸锰分别增加了82.1%和121.5%(P0.07),强络合强度的Mn一AAB中锰的 吸收率比无机硫酸锰和甘氨酸锰分别增加了74.6%和1 12.4%(P0.07),而 弱络合强度的Mn一MetE中锰的吸收率比硫酸锰增加了43.9%,有高于无机 锰的趋势(P0,10)。本研究结果提示,在体外缓冲溶液中培养的外翻肠囊 中,回肠是肉仔鸡小肠吸收锰的主要部位;络合(鳌合)的有机态锰在体 外培养的肉仔鸡小肠外翻肠囊中的吸收率比无机形态锰的高;中等络合强 度和强络合强度有机锰源中锰的吸收率高于弱络合强度有机锰;作为配体 而言,蛋氨酸比甘氨酸更有利于促进锰的吸收。 试验三用外翻肠囊法研究高钙条件下有机锰在肉仔鸡小肠中的 吸收特点 本试验用外翻肠囊法进一步研究高钙对肉仔鸡不同肠段(十二指肠、 空肠和回肠)吸收不同形态锰的影响,以比较有机锰和无机锰在高钙条件 下吸收特点的差异。采用2x4双因子处理安排的完全随机设计,培养液中 的两种钙水平分别为常钙(0.01%)和高钙水平(0.1%),培养液中添加的4 种锰源分别为:硫酸锰、弱络合强度的蛋氨酸锰(Mn一MetE)、中等络合强 度的氨基酸锰(Mn一AAA)和强络合强度的氨基酸锰(Mn一AAB)。培养液 中锰的添加量均为120陀/m1,培养时间为30分钟。为了扣除内源的影响, 在常钙和高钙水平下各设置1个零添加锰水平处理。将80只31日龄AA肉 公鸡随机分到以上设置的10个组,每组8个重复,每个重复l只鸡,每只 鸡的十二指肠、空肠和回肠分别作为相应肠段外翻肠囊的一个重复。结果 表明:(l)体外培养回肠肠囊对锰的吸收率约为十二指肠的3一5倍(P0.01), 空肠的吸收率约为十二指肠的2一4倍,但只有常钙水平下的强络合强度有 声务吓 机锰源组、高钙水平下的弱络合强度和强络合强度有机锰源组的十二指肠 和空肠之间表现出明显差异(P0 .01);(2)高钙条件下,十二指肠、空肠 和回肠肠囊对锰的吸收率约为常钙水平下的1.5一2倍(P0.05):(3)空肠 和回肠肠囊对锰的吸收率受到添加锰源的显著影响(P0.06)。空肠和回肠 肠囊对强络合强度的Mn~AAB中锰


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