收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

毒害艾美球虫cDNA文库的构建和基因筛选

卞庆松  
【摘要】: 鸡球虫属于顶复器门(Apicomplexa)、孢子虫纲(Sporozoa)、球虫亚纲(Coccidiasina)、真球虫目(Eucoccidiorida)的寄生原虫,頂复器门包含了一些重要的兽医寄生虫和医学寄生虫(如艾美球虫、疟原虫、巴贝斯虫、弓形虫、隐孢子虫、住肉孢子虫等)。在这些寄生虫中,寄生在肠道上皮细胞的艾美球虫(Eimeria)主要破坏家禽肠道上皮细胞,从而威胁家禽健康和导致全球范围内养禽业的严重经济损失。长期以来球虫病的防治以药物为主,但是由于球虫抗药性的普遍存在,新药研制费用昂贵,加之药物或抗生素在家禽产品中的残留问题越来越受到消费者的关注,迫使人们寻求防治的新途径。在众多控制球虫病的方法中,基因疫苗防治前景诱人,而要研制高效的基因工程疫苗关键在于寻找最佳的虫体抗原基因。本研究以毒害艾美球虫(E. necatrix)为研究对象,从其普通生物学和分子生物两方面鉴定其为纯种,后用其孢子化卵囊构建了cDNA表达文库,从中筛选免疫抗原基因,获得了以下结果。 1.按照传统生物学鉴定方法选取潜在期、寄生部位、最短孢子化时间、卵囊形状、卵囊大小及孢子囊大小等指标对毒害艾美球虫(广东株)进行了鉴定。获取了毒害艾美球虫的一系列生物学特性,从而初步验证了该单卵囊分离株是纯种。为了进一步验证该虫株是纯种,分别利用柔嫩艾美球虫(E. tenella)、巨型艾美球虫(E. maxima)和堆形艾美球虫(E. acervulina)的特异性引物,对纯化的卵囊DNA进行PCR扩增,结果扩增不出来这些引物相应的目的片段,从分子生物学角度验证了该虫株是纯种。 2.用纯化的毒害艾美球虫孢子化卵囊口服接种感染雏鸡,制备鸡抗毒害艾美球虫阳性血清;用纯化的毒害艾美球虫孢子化卵囊超声裂解后的可溶性蛋白作为抗原加佐剂乳化后免疫家兔,制备兔抗毒害艾美球虫阳性血清。经ELISA检测,结果表明仅兔抗毒害艾美球虫阳性血清可用于毒害艾美球虫cDNA表达文库的免疫学筛选。 3.以毒害艾美球虫孢子化卵囊为材料,利用SMARTTM cDNA文库构建试剂盒成功构建了毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库。原始文库滴度为4.72×106 pfu/mL,扩增后的文库滴度为2.62×1010 pfu/mL,文库重组率为97.5%,插入片段集中在500~1 100 bp之间。 4.利用兔抗毒害艾美球虫阳性血清对毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库进行免疫学筛选,共获得3个阳性克隆。经鉴定,3个阳性克隆基因序列一致,基因的阅读框为344 bp,共编码133个氨基酸。登录GenBank进行同源性比较,结果该基因与已发表的毒害艾美球虫核糖体小亚基RNA基因、柔嫩艾美耳球虫核糖体小亚基RNA基因有很高的同源性,分别为98%和97%,说明该基因为毒害艾美球虫核糖体小亚基RNA基因。同时,用文库整体转化质粒方法对文库进行测序,获得了一致的EST序列,经过GenBank比对发现和柔嫩艾美球虫核糖体小亚基RNA基因的同源性为97%。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 任文仕;朱庆;杨琴;李地艳;吴华莉;尹华东;舒刚;刘益平;蒋小松;赵小玲;;不同品系鸡肌内脂肪和肌苷酸含量比较分析[J];中国畜牧兽医;2011年06期
2 赵振华;黎寿丰;黄华云;李春苗;张静;薛龙岗;丁余荣;;鸡核受体辅激活蛋白1基因的荧光定量PCR检测[J];江苏农业学报;2011年03期
3 李欣;代朝水;刘兆暄;韩艺;;提高鸡只免疫力的措施[J];现代农业科技;2011年14期
4 赵海云;;几种鸡维生素缺乏症的防治[J];畜牧与饲料科学;2011年07期
5 姚淑红;;鸡金黄色葡萄球菌的分离鉴定[J];山东畜牧兽医;2011年08期
6 王勇;;鸡非典型新城疫的发生与防治[J];现代农业科技;2011年16期
7 李旭;陈阳;章玲玲;潘晓花;杜银峰;;益生素在鸡生产中的应用研究进展[J];家禽科学;2011年06期
8 徐兵;李同明;格桑达娃;王慧;;鸡源性大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验[J];山东畜牧兽医;2011年07期
9 朱静文;余为一;;1株抗鸡CD8α链单克隆抗体的鉴定[J];安徽农业科学;2011年20期
10 张丽;;鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验[J];山东畜牧兽医;2011年07期
11 肖明举;;提高鸡种蛋孵化率的技术措施[J];中国畜禽种业;2011年06期
12 刘小艳;方炳虎;袁照红;朱鑫;杨利军;;恩诺沙星混悬液对人工诱发鸡大肠杆菌病的疗效观察[J];养禽与禽病防治;2011年06期
13 刘唯依;廖和荣;李岩;李兴明;周玲玲;梁杜;赵宗胜;李大全;;鸡与鹌鹑属间杂交抗精子抗体的检测分析[J];西北农业学报;2011年07期
14 赵蕾;于新友;王金良;李坤林;;鸡球虫疫苗研究现状[J];动物医学进展;2011年08期
15 穆成龙;车东升;刘飞飞;王波;张海全;孙泽威;秦贵信;;鸡小肠上皮细胞表面大豆凝集素受体的标记[J];吉林农业大学学报;2011年05期
16 邓翠芬;赵齐;;强力霉素对鸡大肠杆菌病的临床治疗效果[J];中国畜禽种业;2011年06期
17 杜懿婷;高庆;杨玉峰;周磊;何健;;鸭TME法适宜条件确定的研究进展[J];饲料工业;2011年15期
18 王军;霍军;程会昌;时菊爱;;白术和白头翁水煎液对鸡离体空肠运动张力的比较研究[J];养禽与禽病防治;2011年05期
19 李现胜;;鸡致病性大肠杆菌的实验室诊断技术[J];中国畜牧兽医文摘;2011年03期
20 胡国顺;常国斌;王克华;刘艳;陈蓉;栾德琴;龚琳琳;陈国宏;;鸡Nramp1基因多态性与部分免疫指标相关性分析[J];中国畜牧杂志;2011年15期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杜红丽;凌飞;罗庆斌;张细权;;鸡HSP70蛋白三维结构的同源建模[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
2 孙国波;;白消安诱发建立鸡无精子症模型的研究[A];中国家禽科学研究进展——第十四次全国家禽科学学术讨论会论文集[C];2009年
3 成钧;赵启民;张翼翔;邓少东;;占鸡岗歼灭战[A];转战淮南——新四军第二师史料专册[C];1989年
4 李建喜;高杰;王学智;梁剑平;杨志强;;喹胺醇在鸡体内的一种代谢标示物分析[A];中国毒理学会第五次全国学术大会论文集[C];2009年
5 唐军;聂庆华;张德祥;何丹林;梁少东;张细权;;鸡脂肪性状QTL的精细定位[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
6 姚婧;王宁;王宇祥;王维世;李辉;;Solexa高通量鉴定鸡前脂肪细胞的miRNA表达谱[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
7 姚俊峰;曲鲁江;徐桂云;郑江霞;李俊英;杨宁;;东乡绿壳蛋鸡与矮小型粉壳蛋鸡输卵管子宫部蛋白质组差异表达分析[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
8 刘香;刘红林;陈杰;;鸡输卵管特异性表达人组织型纤溶酶原激活剂的研究[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
9 刘立波;赵桂苹;文杰;陈继兰;郑麦青;;鸡MHC B-L基因SNPs单倍型与免疫性状关系的研究[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
10 姚丽贤;周修冲;陈婉珍;;鸡粪对蔬菜产量及品质的影响[A];中国青年农业科学学术年报[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杜晓惠;鸡多趾候选基因的SNPs及表达差异研究[D];四川农业大学;2005年
2 姜润深;鸡PRL、PRLR和POU1F1基因变异对繁殖及POU1F1对生长性状的遗传效应[D];中国农业大学;2005年
3 杨彩然;禽源H3、H4亚型流感病毒的序列分析及对鸡的致病性研究[D];内蒙古农业大学;2005年
4 闫若潜;鸡BF2和β2m分子特征与二级结构及其复合体鉴定病毒表位的研究[D];中国农业大学;2005年
5 张易祥;2,2’5,5’-四氯联苯和雌二醇对鸡生殖功能的影响[D];中国农业大学;2005年
6 李慧锋;鸡脂肪代谢相关基因的表达与网络分析[D];中国农业大学;2005年
7 颜炳学;鸡类胰岛素生长因子-Ⅰ基因单碱基突变对该基因转录、表达以及对生长、屠体性状的影响[D];中国农业大学;2005年
8 郭小权;高钙日粮致鸡痛风的机理研究[D];南京农业大学;2005年
9 栾维民;鸡外周免疫器官中淋巴细胞发育的研究[D];吉林农业大学;2008年
10 刘桂琼;鸡生长和屠体性状遗传及其联合超显性研究[D];扬州大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 鲍鸣;鸡IFN-γ基因的克隆与原核表达[D];安徽农业大学;2005年
2 杜云良;口服头孢拉定对鸡大肠杆菌病的治疗研究[D];中国农业大学;2005年
3 舒秀伟;鸡IL-2基因的克隆、原核表达及对DNA疫苗免疫增强作用的实验性研究[D];吉林大学;2005年
4 薛伟芳;甲砜霉素在健康及多杀性巴氏杆菌感染鸡的药动学[D];扬州大学;2008年
5 罗李媛;川牛膝多糖的提取工艺及其对肉鸡免疫调节作用的研究[D];四川农业大学;2008年
6 马群;不同发育阶段黄粉虫及虫粪蛋白质的利用效益评价[D];四川农业大学;2009年
7 汤春莲;鸡体内氯霉素残留的检测方法及消除规律研究[D];安徽农业大学;2005年
8 王珅;禽波氏杆菌母源抗体对雏鸡早期免疫保护试验研究[D];吉林大学;2005年
9 李杰峰;鸡新城疫病毒地方株的分离鉴定及其HN基因的克隆与序列分析[D];河北农业大学;2006年
10 匡光伟;CTC在鸡体不同组织器官中的残留及其在鸡粪中的降解研究[D];湖南农业大学;2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 赵慧 高鹏;“鸡王”的农业工业化实践[N];人民政协报;2005年
2 ;鸡尾情怀[N];华夏时报;2005年
3 齐林;争市场鸡味更浓[N];经理日报;2005年
4 本报记者 彭 燮;鸡精:领“鲜”不等于领先[N];中国质量报;2005年
5 李学恒;奇特的民族婚俗与鸡[N];贵州民族报;2005年
6 刘为;科学捉鸡方法[N];山西科技报;2005年
7 李任;开春细养开产鸡[N];中国畜牧报;2005年
8 吕纪增;鸡的产蛋异常及防治策略[N];中国畜牧兽医报;2005年
9 记者 彭加权;芦山鸡价下降风波[N];雅安日报;2005年
10 陈耀贤;“鸡王”的6大“鸡事”[N];深圳特区报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978