水溶性绿茶多糖的系统分级纯化及其免疫活性与清除羟自由基活性的研究

【摘要】： 多糖因具有多种生物活性越来越引起人们的重视,为了筛选出高免疫活性和高清除羟自由基活性的多糖组分,将炒青绿茶经水提取后,茶汤用0.2μm孔径的膜过滤,滤液依次经过150kD、20kD、6kD的膜组件进行分级和浓缩。得到150kD、20kD、6kD三部分的截留液。同时对茶渣进行碱提处理,以比较水提绿茶多糖与碱提绿茶多糖的各分级组分理化性质及免疫活性等方面的差异。分别将150kD、20kD、6kD三部分的截留液和碱提多糖依次经过DEAE-52纤维素离子交换层析和丙烯葡聚糖凝胶Sephacryl S-300柱层析系统分离、纯化,HPGPC-ELSD鉴定各多糖组分的纯度及分子量分布,并测定了各分级组分对小鼠巨噬细胞系Raw264.7检测免疫活性的影响以及清除羟自由基的活性。结果表明,茶汤中50%以上的干物质能够透过20KD的膜,对于多糖来说,则以20kD膜截留液中含量最高,其占干物质的比重可达到36.86%,150kD膜和6kD膜截留部分中多糖含量分别为27.13%和21.16%,而透过6kD膜部分中占干物的含量则仅为1.09%,由此可见,膜分离处理对于茶多糖的分离纯化效果明显。水溶性绿茶多糖经过系统分级后共得到了20多个分级组分;HPGPC-ELSD鉴定各多糖组分的纯度及分子量分布,结果表明得到7个均一水提多糖组分和两个碱提多糖组分;用小鼠巨噬细胞系Raw264.7检测免疫活性,发现对小鼠巨噬细胞Raw264.7有显著活性的多糖组分大多集中在20kD左右,有较强清除羟自由基的多糖组分大多集中在6kD左右,部分为20kD左右的多糖,且大多为不均一多糖,而碱提多糖的免疫活性相对较低。