收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

土壤中粉红粘帚霉67-1荧光定量PCR监测体系的建立及应用

陶萌  
【摘要】: 利用粉红粘帚霉等生防菌制剂防治水稻纹枯病是当前极有潜力的生物防治手段之一。但目前尚缺乏对土壤中外源引入的生防菌进行定位、定量的跟踪分析,及对病原菌与生防菌互作种群动态的研究依据,这很大程度上影响了生物防治的应用。本论文以生防真菌粉红粘帚霉67-1菌株为材料,通过近缘菌株比对,设计出具有种以上特异性探针,建立并优化了实时荧光定量PCR体系,并利用该方法对粉红粘帚霉与水稻纹枯病菌在自然土壤中互作的种群动态进行了初步研究。所得结果如下: 粉红粘帚霉实时荧光定量PCR检测方法的建立与验证:为了建立植病生防真菌粉红粘帚霉67-1菌株的荧光定量PCR检测方法,收集了目标菌株、粘帚霉属其它多个种及近缘木霉属的多个种共20个菌株,并进行了ITS区测序。以200 bp左右差异较大区段设计出探针和引物。其序列如下:前引物:5’-GCGTCATTTCAACCCTCAC-3’;后引物:5’-GAATATCACTACTTCG CAGAGG-3’;LNA探针:5’(FAM)-CGGGTCCGCCACTAGA-(Eclipse)3’。该引物及探针能有效扩增目标菌株,而对其他17株非目标菌株没有扩增。由于两株粉红粘帚霉的ITS区序列高度重复,出现扩增信号,表明所设计的引物和探针具有种以上特异性。以目标菌株的阳性克隆质粒作为标准物质,建立了标准曲线,相关系数为0.9989;扩增效率达95.0%。土壤样品应用实验显示,其直线回归相关系数为0.9989,表明所建立的土壤中粘帚霉67-1菌株荧光定量PCR检测方法合理、有效、快速、实用,符合生态学研究的要求。 土壤中粉红粘帚霉与水稻纹枯病菌互作的种群动态研究:将0.01%、0.1%、0.5% (w/w)的粉红粘帚霉接种体及1%(w/w)玉米砂培养基中培养的水稻纹枯病菌接种体、残体及菌核加入到土壤中,每15 d检测生防菌与病原菌拷贝数变化,共监测6个周期。结果表明,在不同粘帚霉添加量下,粘帚霉与水稻纹枯病菌的DNA含量在前45 d均处于下降趋势,60 d时二者同时出现了上升。75 d时,0.1%及0.5%粘帚霉添加量(w/w)的处理中,纹枯病菌的数量相对于60 d降低30%左右,同时生防菌数量上升。生防菌添加量为0.1% (w/w)时,纹枯病菌数量出现明显回落,因此我们建议粘帚霉作为生防菌的田间施用量为0.1% (w/w)。 为深入了解温度及含水量等环境因子对生防菌及病原菌数量的影响,将0.1%(w/w)粉红粘帚霉接种体及1% (w/w)水稻纹枯病菌接种体添加到土壤中,在不同温度、含水量下培养,对粉红粘帚霉及水稻纹枯病菌拷贝数变化进行监测。其结果表明:在15%含水量,20℃、30℃下,粉红粘帚霉的拷贝数在前10 d急剧下降,在10~50 d中,则持续增长,在50 d时,15%含水量20℃下粘帚霉数量恢复到接种水平的25%;水稻纹枯病菌的拷贝数在前20 d呈持续下降趋势,在30 d时出现短暂的数量回升,在40~50 d时又回落到较低水平(5441.8±3056.4)。结果显示,粉红粘帚霉在15%含水量、20~30℃条件下适宜生长。 本实验成功建立了粉红粘帚霉real-time PCR定量检测体系,为深入研究该菌在土壤中的生态特性和群体动态及其与病原菌互作的种群动态提供了快速、有效的检测方法;为生物防治因子的防效评价方法提供了新依据。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 张拥华,高会兰,马桂珍,李世东*;粉红粘帚霉67-1菌株寄生核盘菌研究[J];植物病理学报;2004年03期
2 张保元;许梦秋;谢响明;;粉红粘帚霉67-1液体发酵生产生物农药概述[J];现代农业科学;2009年03期
3 莫明和,董琳茜,迟胜起,张克勤;立枯丝核菌重寄生真菌的筛选[J];植物病理学报;2002年01期
4 张拥华;李晶晶;彭志刚;李世东;谢响明;;粉红粘帚霉67-1菌株原生质体的形成和再生[J];中国生物防治;2006年04期
5 陶萌;李世东;张拥华;;土壤中生防菌粉红粘帚霉67-1的荧光定量PCR检测方法[J];中国生物防治;2009年01期
6 张保元;孙漫红;张拥华;谢响明;李世东;;Clonostachys rosea 67-1液生孢子形成及其抗性研究[J];植物病理学报;2010年01期
7 刘会清;张爱香;马海莲;李世东;郭荣君;孙漫红;;生防菌剂与生物有机肥复配对黄瓜抗病促生效果的研究[J];北方园艺;2011年05期
8 ;信息高速[J];浙江林业;2008年12期
9 李洪连,王守正,张明智;棉花抗、感枯萎病品种根际真菌区系分析[J];河南农业大学学报;1991年04期
10 张成霞;南志标;李春杰;王彦荣;;杀菌剂拌种防治草坪草病害的研究进展[J];草业学报;2005年06期
11 赵向丽;尤芳芳;徐辉;苏艳秋;吴鹏;曹毅;乔代蓉;;油菜根肿休眠孢子间接酶联免疫检测法的建立[J];应用与环境生物学报;2008年05期
12 ;生物防治[J];生物技术通报;1990年10期
13 李春杰,南志标,崔嵩,胡玉骄,李东明,李强,李悦,李舟;几种真菌对3种常见冷季型草坪草的致病性测定[J];草业科学;2003年12期
14 沈登荣;和绍禹;张宏瑞;李正跃;;蜜蜂作为病原物载体的研究进展[J];中国生物防治;2010年S1期
15 容向东,王庄;松苗猝倒病(Rhizoctonia solani Kuhn)生物防治的研究[J];华南农业大学学报(自然科学版);1983年04期
16 董锦艳;李铷;张克勤;;粘帚霉属真菌代谢物的研究进展[J];微生物学通报;2006年02期
17 王家和,唐嘉义,何永宏,刘云龙;大围山自然保护区土壤真菌名录初报[J];云南农业大学学报;2000年03期
18 孟祥东,傅俊范,严雪瑞,滕学灵;灰霉病菌(Botrytis cinerea)生物防治研究进展[J];沈阳农业大学学报;2003年06期
19 周薇,莫明和;土壤及其微生物对真菌的抑菌作用[J];云南大学学报(自然科学版);2002年04期
中国重要会议论文全文数据库 前5条
1 张拥华;李世东;刘杏忠;;一株对核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)菌核具强寄生性的粉红粘帚霉(gliocladium roseum)[A];新世纪(首届)全国绿色环保农药技术论坛暨产品展示会论文集[C];2002年
2 马桂珍;李世东;谢丙炎;张拥华;刘杏忠;吕国忠;;粉红粘帚菌对核盘菌和立枯丝核菌的菌寄生作用机制研究[A];中国菌物学会第三届会员代表大会暨全国第六届菌物学学术讨论会论文集[C];2003年
3 赵明莲;张克勤;;食线虫真菌碱性蛋白酶cDNA基因的克隆及在Pichia pastoris中的异源表达[A];中国菌物学会第三届会员代表大会暨全国第六届菌物学学术讨论会论文集[C];2003年
4 孙漫红;周婷;李世东;;粉红粘帚霉67-1可湿性粉剂防治番茄灰霉病和大豆菌核病效果评价[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
5 魏美娜;杨红;刘志恒;张江林;李昕月;;辽宁省玉米田土壤真菌分离和鉴定[A];中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王瑞虎;粉红粘帚霉诱导番茄果实对灰霉病的非寄主抗性研究[D];东北农业大学;2013年
2 王海栋;粉红粘帚霉QST-98固态发酵条件及制剂研究[D];青岛科技大学;2013年
3 姜杰;菌寄生相关基因对粉红粘帚霉的转化及高效转化子特性研究[D];北京林业大学;2012年
4 张保元;植物病害生防菌粉红粘帚霉67-1发酵工艺研究[D];北京林业大学;2009年
5 陈巧云;粉红粘帚霉67-1菌株对核盘菌的寄生性及其分子机理[D];西南大学;2006年
6 陶萌;土壤中粉红粘帚霉67-1荧光定量PCR监测体系的建立及应用[D];中国农业科学院;2008年
7 刘颖;粘帚霉UN_7-108选育及室内药效研究[D];青岛科技大学;2013年
8 侯思雯;甘肃高寒阴湿地区蚕豆苗期根腐病的研究[D];甘肃农业大学;2011年
9 刘会清;植病生防菌剂对连作设施蔬菜的防病促生效果研究[D];中国农业科学院;2010年
10 杨荣华;粘帚霉GR菌株高产β-1,3-葡聚糖酶诱变、酶分离与性质研究及菌株鉴定[D];扬州大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 徐娜;奇特霉菌可将植物废料转变为可燃气体[N];中国绿色时报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978