收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

北京油鸡细菌人工染色体文库的构建与肉质风味相关基因的研究

吴宏梅  
【摘要】: 为了有效保存我国优质肉鸡品种资源——北京油鸡,本研究构建了北京油鸡细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome)文库,并将ATIC(aminoimidazole carboxamide ribonucleotide transformylase and IMP cyclohydrolase)基因和L-FABP(liver fatty acid-binding protein)基因作为影响鸡肉质和风味的相关基因,对基因的结构、在体外成纤维细胞中的表达及亚细胞定位进行了研究,同时获得了稳定表达ATIC基因的阳性克隆细胞株。 本研究抽取雌性北京油鸡静脉血,用于制备大分子量基因组DNA,制备好的基因组DNA经HindⅢ部分酶切后,二次脉冲电泳分离所需DNA片段。电洗脱回收100~400kb范围的片段,与pBeoBAC11载体连接,转化DH10B感受态细胞,挑取和保存白色单克隆。本研究所构建北京油鸡基因组BAC文库,含有115,200个BAC克隆(保存在30个超级池,每个超级池由10个384孔板组成)。随机挑选了200个BAC克隆的插入片段进行估计,平均大小为158kb,其中空克隆的比例为0.9%,表明文库的覆盖率为13.7倍,预计从文库中筛选到单拷贝基因的机率为99.99%。文库中70%的克隆插入大于100kb,而且有部分克隆甚至大于300kb,这样大小的插入可以满足所有试验对于片段大小的要求。 本研究取北京油鸡鸡胚和阿勒泰羊的耳缘组织,通过组织块贴壁培养法,成功构建了北京油鸡和阿勒泰羊的成纤维细胞系,并对所建细胞系进行了各项生物学特性检测,同时对绿色荧光蛋白基因转染成纤维细胞的各项影响因素进行了研究。结果表明,细胞系的各项指标均达到美国典型培养物中心(American type Culture Collection, ATCC)细胞系鉴定标准,为研究外源基因在成纤维细胞中的表达与调控提供了优质的靶细胞。 本研究提取北京油鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌等不同组织的总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到L-FABP基因,并检测ATIC基因mRNA在不同组织中的差异表达水平。将ATIC基因完整开放阅读框重组至真核表达载体pDsRed1-N1, pEYFP-N1及pEGFP-N3的多克隆位点EcoR I和BamH I之间,将L-FABP基因完整开放阅读框重组至pEGFP-N3的多克隆位点XhoI和EcoRI之间,成功构建带有报告基因的真核重组表达载体pDsRed1-N1-ATIC, pEYFP-N1-ATIC, pEGFP-N3-ATIC和pEGFP-N3-L-FABP。采用脂质体介导法,将pDsRed1-N1-ATIC、pEYFP-N1-ATIC和pEGFP-N3-ATIC导入北京油鸡体外培养成纤维细胞中,将pEGFP-N3-L-FABP导入阿勒泰羊体外培养成纤维细胞中。对ATIC基因和L-FABP基因在细胞中的表达、亚细胞定位、阳性细胞生长与增殖状况进行了研究,并利用G418药物筛选和进行单克隆化培养。结果发现,在转染后24h、48h和72h,各个重组融合蛋白的转染率在10.3%~53.2%之间。重组融合蛋白在北京油鸡和阿勒泰羊成纤维细胞的细胞核与细胞质均分布,但主要集中在细胞核周围。经RT-PCR扩增确认ATIC融合蛋白基因整合到北京油鸡成纤维细胞的基因组中,L-FABP融合蛋白也整合到阿勒泰羊成纤维细胞的基因组中,Western blot检测验证发现ATIC融合蛋白在北京油鸡成纤维细胞的基因组中获得正常表达。经药物筛选和单克隆化培养,获得了表达pDsRed-N1-ATIC,pEYFP-N1-ATIC与pEGFP-N3-ATIC融合蛋白的阳性克隆细胞株。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 于太永,关伟军,马月辉,文杰,杨公社;北京油鸡蛋胚贮存时间与体外成纤维细胞生长状况相关性研究[J];中国畜牧兽医;2005年05期
2 刘华贵;;北京油鸡饲养技术与高效养殖模式[J];农村养殖技术;2011年07期
3 ;北京市农林科学院畜牧所北京油鸡研究开发中心[J];科学种养;2006年02期
4 朱子玉,曹广力,朱越雄,陈寿南;丝毛乌骨鸡和北京油鸡超氧化物岐化酶活性比较研究[J];中国畜牧杂志;2000年06期
5 徐淑芳;高档优质黄羽肉鸡——北京油鸡[J];中国牧业通讯;1998年01期
6 罗时和;;北京油鸡[J];农业知识;2008年09期
7 农博;;肉蛋兼用型地方鸡——北京油鸡[J];农业知识;2009年33期
8 朱子玉,曹广力,朱越雄,陈寿南;丝毛乌骨鸡和北京油鸡超氧化物歧化酶活性比较研究[J];中国家禽;2000年10期
9 ;肉蛋兼用 北京油鸡[J];农民科技培训;2008年06期
10 徐新明;;“北京油鸡”飘香上海餐桌[J];上海企业;2011年01期
11 吕晓娟;北京油鸡与红宝鸡杂交后代的生长性状研究[J];中国家禽;1997年03期
12 刘华贵;;柴鸡养殖换代品种——北京油鸡[J];科学种养;2007年02期
13 王金洛,杨兵,宋维平,秦泽荣,赖平安,徐福洲;生长抑素卵黄抗体(SS-IgY)对北京油鸡生长的影响[J];华北农学报;2001年02期
14 刘华贵;;北京油鸡饲养管理要点[J];科学种养;2006年05期
15 吕连山;方莉;;北京油鸡的开发利用[J];农业科技通讯;1988年10期
16 ;肉蛋兼用型鸡——北京油鸡[J];农村养殖技术;2009年24期
17 段忠岭;;介绍两个地方鸡品种[J];农业知识;2005年31期
18 周潇;;“农广天地”电视节目介绍[J];农民科技培训;2010年11期
19 高履之;谷天满;辛彩云;吕连山;;北京油鸡维生素E缺乏症治疗观察[J];养禽与禽病防治;1982年02期
20 李建伟;黄秀芬;五方;;五爪鸡生产性能和遗传规律研究[J];中国家禽;1992年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张剑;初芹;陶士军;曾另超;刘华贵;;北京油鸡种质资源保护与利用[A];畜牧业环境、生态、安全生产与管理——2010年家畜环境与生态学术研讨会论文集[C];2010年
2 张剑;初芹;王海宏;耿爱莲;刘华贵;;北京油鸡不同组合杂交性能的分析研究[A];第二届中国黄羽肉鸡行业发展大会会刊[C];2010年
3 付睿琦;赵桂苹;刘冉冉;郑麦青;陈继兰;苟钟勇;文杰;;北京油鸡体脂分布与沉积规律研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
4 汤琳琳;陈永灿;周震祥;顾彩菊;杨凯旋;李世玉;何川;赵乐乐;黄启忠;孟和;;五趾北京油鸡趾骨发育相关候选基因表达分析[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年
5 初芹;张剑;王海宏;耿爱莲;陶士军;刘华贵;;北京油鸡早期蛋重及其与体重相关性研究[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年
6 郝婧宇;卢庆萍;张宏福;;持续高温对不同性别北京油鸡生长性能及脂肪沉积的影响[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
7 周向梅;马月辉;关伟军;文杰;;北京油鸡胚胎成纤维细胞系建立与生物学特性研究(英文)[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
8 刘华贵;徐淑芳;陶士军;杨永平;冯国洲;马春建;;北京油鸡不同杂交组合商品鸡肌肉中游离氨基酸含量的比较研究[A];全国畜禽遗传资源保护与利用学术研讨会论文集[C];2005年
9 陶金程;;北京油鸡p27 Kip1基因的克隆及生物信息学分析[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
10 马贺;申丽;施正香;;光照对北京油鸡产蛋期采食行为的影响[A];第五届(2011)中国蛋鸡行业发展大会会刊[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前9条
1 吴宏梅;北京油鸡细菌人工染色体文库的构建与肉质风味相关基因的研究[D];中国农业科学院;2008年
2 周向梅;云南矮马与北京油鸡成纤维细胞系建立与鉴定的研究[D];中国农业大学;2005年
3 刘长青;五指山小型猪基因组BAC文库的构建与北京油鸡风味特性基因的研究[D];中国海洋大学;2008年
4 关媛;黄瓜果刺形成相关基因的定位与克隆[D];上海交通大学;2008年
5 叶满红;鸡脂肪酸结合蛋白基因的克隆及其与肌内脂肪含量关系的研究[D];中国农业科学院;2003年
6 蒋瑞瑞;烟酸对鸡脂肪代谢和肉品质的影响及作用机理[D];中国农业科学院;2010年
7 陈继兰;鸡肉肌苷酸和肌内脂肪含量遗传规律及相关候选基因的研究[D];中国农业大学;2004年
8 崔焕先;肉鸡肌内脂肪形成的分子调控网络及相关基因研究[D];中国农业科学院;2011年
9 赵景鹏;肉鸡肌纤维特性与肉质性状的形成规律及日粮营养调控研究[D];中国农业科学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张爱平;北京油鸡鱼腥味基因和羽速基因检测与分析[D];河北工程大学;2010年
2 汤琳琳;五趾北京油鸡趾骨发育相关候选基因表达分析[D];上海交通大学;2011年
3 郝婧宇;持续高温对不同性别北京油鸡脂肪沉积和脂肪代谢的影响[D];中国农业科学院;2011年
4 周永孝;北京油鸡产蛋高峰期适宜粗蛋白水平的研究[D];河南科技大学;2012年
5 王竹伟;能蛋水平对北京油鸡后期繁殖性能的影响及睾丸基因表达谱的建立[D];甘肃农业大学;2011年
6 刘伟平;HSP70-2基因多态性对北京油鸡精液品质的影响及其抗热应激功能验证[D];扬州大学;2010年
7 刘国芳;北京油鸡饲料转化率与脂肪沉积相关性状的遗传关系及相关候选基因的研究[D];中国农业科学院;2011年
8 胡娟;北京油鸡精液品质遗传参数估计及相关候选基因的研究[D];中国农业科学院;2010年
9 宫雪莲;北京油鸡脂肪干细胞的分离、培养与诱导分化研究[D];中国农业科学院;2010年
10 张海艳;北京油鸡体细胞库的构建及GPAT基因克隆[D];山西农业大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 袁文芝 周清春 刘佳;宫廷黄鸡绝迹20载又现京城[N];科技日报;2005年
2 李君;北京油鸡又回来了[N];消费日报;2008年
3 李君;北京油鸡将成为百姓餐桌上的一道美食[N];消费日报;2008年
4 潘登科;五指山猪是理想的实验动物[N];科技日报;2007年
5 ;北京油鸡饲养管理技术[N];科技日报;2008年
6 杜吟;北京油鸡叫响百年栗园[N];中国质量报;2007年
7 ;北京油鸡味道鲜美营养丰富[N];消费日报;2008年
8 ;科技打造“一区一品”[N];北京现代商报;2006年
9 孟令连 徐秀云 韩冬;特色养殖奔富路[N];唐山劳动日报;2007年
10 王长康;现代养鸡业鸡的品种(下)[N];福建科技报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978